BAPTA是一種鈣選擇性螯合劑。它基本的螯合單位和EDTA類似，只是兩個(gè)脂肪氮被芳香氮所替代。因此，BAPTA在生理pH下不會(huì)被質(zhì)子化。BAPTA的pKa3為5.47，pKa4為6.36。這個(gè)特點(diǎn)顯示了去質(zhì)子化的步驟并不包含在Ca的螯合步驟中。由于不受質(zhì)子的干擾，它的螯合率比EGTA要高很多。BAPTA-AM是BAPTA的乙酰甲酯衍生物，通過(guò)AM法，能被輕易負(fù)載到細(xì)胞中。BAPTA-AM對(duì)于細(xì)胞內(nèi)鈣離子的監(jiān)控是非常有用的。

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(1) 溶解方法

·配制50 mM stock solution

? 例1) 使用100μl DMSO時(shí),(BAPTA-AM的分子量=764.68)

???? 　50 mmol／L = (X g／764.68) mol／100 × 10-6 L

X g／764.68 = 50 × 10-7 mol

????????????? X =0.003823 g = 3.82 mg

? 例2) 使用20mg BAPTA-AM時(shí),

???? 　50 mmol／L = (20 mg／764.68) mol／X L

???????? 　???? X =0.00002615 ÷ 0.05 = 523μl

? 例3) 使用5mg BAPTA-AM時(shí),

???? 　50 mmol／L = (5 mg／764.68) mol／X L

??????? 　????? X =0.000006538 ÷ 0.05 = 130μl

例4) 使用25mg BAPTA-AM時(shí),

???? 　50 mmol／L = (25 mg／764.68) mol／X L

???????????? 　 X =0.00003269 ÷ 0.05 = 654μl

　*保存stock solution的方法和保存時(shí)間

?? 由于AM體遇水容易分解。所以我們推薦現(xiàn)配現(xiàn)用。

?? 使用無(wú)水DMSO,再冷凍的條件下,可以保存約1-2個(gè)月。

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(2) 使用方法

?·稀釋stock solution,添加細(xì)胞。

?? 稀釋濃度:少的 6 – 8 μM , 多的50 μM

??? 例1) 8 μM, 使用10μl 50 mM BAPTA-AM stock solution

???? 　　8 μM = 50 mM ×10μl / Xμl

??????? 　 X = 62,500μl = 62.5 ml

??? 例2) 50 μM, 使用10μl 50 mM BAPTA-AM stock solution

???? 　　50 μM = 50 mM ×10μl / Xμl

??????? 　　 X = 10,000μl = 10.0 ml

?? *關(guān)于細(xì)胞的量,不同的細(xì)胞使用不同的細(xì)胞量。

??? 一般來(lái)說(shuō),和Fura2-AM,Fluo3-AM一樣的量。

論文里面有如下的條件。請(qǐng)參考。

?? 例1) 1.75×10-4 cells/cm2, 25 μM BAPTA-AM

?·培養(yǎng)

?? 培養(yǎng)時(shí)間:20 – 60 分鐘

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