??????碧云天的NAD⁺/NADH檢測試劑盒(WST-8法) (NAD⁺/NADH Assay Kit with WST-8)是一種基于WST-8的顯色反應(yīng)，通過比色法來檢測細(xì)胞、組織或其它樣品中NAD⁺ (氧化型輔酶I)和NADH (還原型輔酶I)各自的量、比值和總量的檢測試劑盒。
??????NAD⁺/NADH以及NADP⁺/NADPH的傳統(tǒng)檢測方法是檢測NADH或者NADPH在340nm處吸收波長的變化，該方法靈敏度較低并易受樣品中有類似紫外吸收物質(zhì)的干擾，并且在紫外檢測過程中通常需要加大檢測樣品量以彌補(bǔ)NADH在340nm處吸光度過小的不足，因此該傳統(tǒng)檢測方法具有很大的局限性。
??????WST-8是MTT的一種升級(jí)替代產(chǎn)品，和MTT或其它MTT類似產(chǎn)品如XTT、MTS等相比有明顯的優(yōu)點(diǎn)。首先，MTT被一些脫氫酶還原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶液來溶解；而WST-8和XTT、MTS產(chǎn)生的formazan都是水溶性的，可以省去后續(xù)的溶解步驟。其次，WST-8產(chǎn)生的formazan比XTT和MTS產(chǎn)生的formazan更易溶解。再次，WST-8比XTT和MTS更加穩(wěn)定，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加穩(wěn)定。另外，WST-8和MTT、XTT等相比，線性范圍更寬，靈敏度更高。
??????WST-8和WST-1相比，檢測靈敏度更高，更易溶解，并且更加穩(wěn)定。
??????本試劑盒使用便捷，無需分離純化細(xì)胞、組織或其它樣品中的NAD⁺和NADH，并且能特異性檢測NAD⁺和NADH，而不檢測NADP⁺和NADPH。本試劑盒可以檢測含量低至0.25μM (5pmol)的NAD⁺或NADH，在0.25μM (5pmol)至10μM (200pmol)之間呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。
??????NAD (Nicotinamide adenine dinucleotide，煙酰胺腺嘌呤二核苷酸)是所有細(xì)胞中都存在的一種輔酶，包括NAD⁺ (氧化型)和NADH (還原型)兩種形式。NAD⁺既是氧化還原反應(yīng)過程中傳遞電子的輔酶，又可以作為很多酶的底物來參與細(xì)胞內(nèi)反應(yīng)。例如Sirtuins家族的Sirt1等去乙?；妇托枰訬AD⁺作為底物進(jìn)行去乙?；磻?yīng)來調(diào)控蛋白的乙?；綇亩鴧⑴c細(xì)胞的生命活動(dòng)過程。NAD⁺在細(xì)胞和體內(nèi)發(fā)揮著重要的功能，其合成和降解及其產(chǎn)物參與細(xì)胞凋亡、代謝調(diào)控和基因表達(dá)的調(diào)控等，并且NAD⁺的減少是細(xì)胞死亡的主要因素之一。雖然NMNAT (nicotinamide mononucleotide adenylyltransferase)是NAD+的合成酶，包括Nmnat1、Nmnat2和Nmnat3，但NAMPT (Nicotinamide phosphoribosyltransferase)通常被認(rèn)為是NAD⁺合成的限速酶。NAD⁺在調(diào)節(jié)細(xì)胞氧化還原狀態(tài)方面的重要性以及調(diào)控信號(hào)通路及轉(zhuǎn)錄方面的功能，使得NAD⁺及其合成和消耗的酶成為多種疾病的潛在藥物靶點(diǎn)。
??????本試劑盒可檢測樣品中的NAD⁺、NADH以及它們的比值，具體原理如下：

??????本試劑盒適用于檢測細(xì)胞、組織以及其它適當(dāng)樣品中的NAD⁺和NADH各自的量、比值和總量。
??????在檢測組織及其它樣品中的NAD⁺、NADH以及它們的比值時(shí)，考慮到有些樣品本身的顏色對(duì)450nm處吸光值的檢測有影響，建議設(shè)置加入樣品而不加入乙醇脫氫酶的對(duì)照。

保存條件：
??????-20℃保存，一年有效。顯色液(S0175-2)和NADH (S0175-3)須-20℃避光保存。NADH配制成溶液后，須適當(dāng)分裝后-80℃保存。所有試劑避免反復(fù)凍融。
注意事項(xiàng)：
??????本試劑盒中的所有試劑均需要冷凍保存，請(qǐng)嚴(yán)格按照保存條件進(jìn)行保存。如果不是一次用完，為避免反復(fù)凍融導(dǎo)致產(chǎn)品失效，請(qǐng)適當(dāng)分裝后保存。
??????NADH不太穩(wěn)定，取出NADH后請(qǐng)盡快使用。如果發(fā)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不理想，很有可能是標(biāo)準(zhǔn)品發(fā)生了降解。
??????由于NAD⁺/NADH提取液比較粘稠，以該提取液作為稀釋液時(shí)，無論對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品還是樣品進(jìn)行稀釋，在稀釋過程中務(wù)必保證稀釋均勻，否則易造成實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)產(chǎn)生較大波動(dòng)。
??????在樣品加樣和混勻過程中，須盡量避免產(chǎn)生氣泡，以免影響最終的吸光度測定。
??????如果不能非常嚴(yán)格地控制反應(yīng)溫度和反應(yīng)時(shí)間，每次檢測都需要設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)曲線。
??????如果樣品溶液中NAD⁺和NADH濃度過高或過低，不在試劑盒的線性檢測范圍內(nèi)時(shí)，可適當(dāng)調(diào)整樣品或者提取液的用量。
??????由于NAD⁺和NADH很不穩(wěn)定，在凍存過程中較易降解，所以宜盡量使用新鮮樣品進(jìn)行檢測。
??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
??????為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。