??????PreScission?Protease是一種大腸桿菌中重組表達(dá)的帶GST標(biāo)簽的人鼻病毒14型的3C蛋白酶(human?rhinovirus?(HRV)
type?14?3C?protease)，也稱HRV?3C?Protease或HRV3C?Protease，能在低溫條件下(4°C)特異性地識(shí)別八肽序列Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln-Gly-Pro或核心五肽序列Leu-Phe-Gln-Gly-Pro，并在Gln和Gly氨基酸殘基之間進(jìn)行酶切，常用于去除融合蛋白的Glutathione?S-transferase?(GST)、His或者其它標(biāo)簽的蛋白酶。
??????建議把GST或His等標(biāo)簽設(shè)計(jì)在融合蛋白的N端，在GST或His等標(biāo)簽與目的蛋白之間設(shè)計(jì)加入PreScission?Protease?專一性識(shí)別與酶切的上述八肽序列，這樣在GST或His標(biāo)簽被酶切后，在目的蛋白的N端僅有兩個(gè)額外的Gly-Pro氨基酸殘基，從而限度地減少了對(duì)其結(jié)構(gòu)和功能的影響。
??????本PreScission?Protease帶有GST標(biāo)簽，特別適合用于GST標(biāo)簽蛋白的在柱酶切。在切割GST標(biāo)簽蛋白的時(shí)候，切下的GST標(biāo)簽和PreScission?Protease可結(jié)合于GST純化柱(GST-tag?Purification?Resin)上，而目的蛋白在穿透液中，這樣洗脫下來(lái)的蛋白中就不會(huì)含有GST標(biāo)簽和PreScission?Protease，從而極大地方便了目的蛋白的純化。GST標(biāo)簽酶切去除的詳細(xì)說(shuō)明可以參考碧云天的P2251/P2253/P2255?BeyoGold??GST-tag?Purification Resin和P2262 GST標(biāo)簽蛋白純化試劑盒的說(shuō)明書(shū)。
??????酶活性單位定義：5°C反應(yīng)16小時(shí)，能夠切割100μg GST標(biāo)簽蛋白達(dá)90%以上所需的酶量定義為一個(gè)活性單位。
??????碧云天PreScission?Protease酶活性鑒定結(jié)果可參考圖1。

??????圖1.?PreScission?Protease切割GST標(biāo)簽蛋白的效果圖。含有PreScission?Protease識(shí)別位點(diǎn)的56kD?GST標(biāo)簽蛋白與PreScission?Protease進(jìn)行反應(yīng)，底物的用量為100μg，酶的用量依次為0、0.25、0.5、1、2、4U，5°C在1X?PreScission
Buffer中反應(yīng)16小時(shí)后取樣進(jìn)行SDS-PAGE電泳和考馬斯亮藍(lán)染色。酶切產(chǎn)物大小為約30kD的目的蛋白和約26kD的GST標(biāo)簽。

??????PreScission Protease分子量大小約46 kDa，純度≥95%。
??????PreScission Protease儲(chǔ)存液組成為：50mM Tris-HCl，150mM NaCl，10mM EDTA，1mM DTT，50%(v/v) glycerol，pH 8.0。
??????10X PreScission Buffer組成為：500mM Tris-HCl，1.5M NaCl，10mM EDTA，10mM DTT，pH 7.5。
??????PreScission Protease的酶切體系中可以兼容1% Triton X-100、Tween-20或NP-40，10mM EDTA和500mM NaCl。
??????本產(chǎn)品一個(gè)包裝含有500單位的酶，可用于約50mg帶有PreScission Protease識(shí)別位點(diǎn)的融合蛋白的切割。
包裝清單：

保存條件：
??????-20℃保存。
注意事項(xiàng)：
??????100mM ZnCl₂、4mM AEBSF和100μM Chymostatin會(huì)抑制PreScission Protease的酶活性50%以上。
??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
??????為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。