產(chǎn)品描述

       全血直接PCR試劑盒（Animal Blood Direct PCR Kit）可以直接對(duì)全血樣本進(jìn)行PCR，無需DNA提取或樣品處理，大大降低了污染風(fēng)險(xiǎn)，縮短了檢測(cè)時(shí)間。
 

試劑盒中包含配方優(yōu)化的2× Blood Master Mix，具有很強(qiáng)抑制物耐受性，人血的模板加入量可達(dá)45%，鼠血的可達(dá)20%，可以靈敏的擴(kuò)增血液樣本中基因組和外源目的DNA片段。2× Blood Master Mix包含了用于PCR擴(kuò)增除模板和引物外的所有組分，擴(kuò)增產(chǎn)物末端加A，適用于Hieff Clone™快速克隆試劑盒（貨號(hào)：10907ES60/10908ES60）。

該試劑盒可用于直接擴(kuò)增的血樣類型包括：新鮮血液、4℃貯存血液、冷凍血液以及儲(chǔ)存在Whatman 903®和FTA®商用卡上的干血漬，且兼容所有常規(guī)抗凝劑（EDTA、檸檬酸鹽、肝素等）。適用樣本來源包括人血、鼠血、雞血、鳥血、牛血、狗血等。

產(chǎn)品組分
 

a）2× Blood Master Mix：包含Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、MgCl₂、PCR反應(yīng)增強(qiáng)劑、優(yōu)化劑以及穩(wěn)定劑等。

b）6× DNA Loading buffer：不含SDS。

運(yùn)輸和保存方法
 

冰袋運(yùn)輸。-20℃保存。避免反復(fù)凍融。

操作方法
 

1. PCR反應(yīng)體系配制

注：使用前務(wù)必充分混勻，避免劇烈震蕩產(chǎn)生過多氣泡。

a）模板使用量：進(jìn)行基因組上的目的片段檢測(cè)，建議使用少量的血液量作為模板；檢測(cè)血液樣本中某種病毒或細(xì)菌等的目的片段，建議擴(kuò)大PCR體系并使用較大量的血液模板。血液模板最多占PCR體系的45%（人血）、20%（鼠血）。若模板使用含有血液的采集卡，可截取直徑1-4 mm的血點(diǎn)，直接加入20-50 μL PCR反應(yīng)體系進(jìn)行擴(kuò)增。

b）引物濃度：通常引物終濃度為0.2 μM，也可以根據(jù)情況在0.1-0.5 μM之間進(jìn)行調(diào)整。

c）反應(yīng)體系：推薦使用20 μL或 50 μL，以保證目的基因擴(kuò)增的有效性和重復(fù)性。

d）體系配制：配制好PCR反應(yīng)體系，置于渦旋儀上渦旋混勻，瞬時(shí)離心將反應(yīng)液集于管底。

2. PCR反應(yīng)條件設(shè)置

a）預(yù)變性：95℃，5 min可以讓白細(xì)胞裂解，釋放可用于PCR擴(kuò)增的基因組DNA。請(qǐng)勿縮短時(shí)間或降低溫度。

b）退火溫度：退火溫度設(shè)置為引物Tm值即可。然而，使用高的退火溫度可以有效減少非特異性擴(kuò)增，并提高全血模板的擴(kuò)增效率。因此，如擴(kuò)增產(chǎn)物特異性較差，可以建立一個(gè)溫度梯度反應(yīng)去尋找引物模板最適退火溫度。

c）延伸時(shí)間：按30 sec/kb設(shè)定，如不足30 sec，設(shè)置30 sec即可。

d）擴(kuò)增循環(huán)數(shù)：35個(gè)循環(huán)已可以擴(kuò)增足量產(chǎn)物。太多的循環(huán)將會(huì)導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增增加。