截短型T4 RNA連接酶2為T4 RNA連接酶2的突變體，能特異性將5’末端預(yù)腺苷化的DNA或RNA連接到RNA的3’ OH末端。與野生型與T4 RNA連接酶2相比，截短型T4 RNA連接酶2催化的的連接反應(yīng)無需ATP，但需預(yù)腺苷化接頭，這樣連接反應(yīng)的背景程度的降低，同時(shí)降低賴氨酰腺苷化酶的活性。該酶可用于二代測序small RNA 的文庫構(gòu)建，優(yōu)化了接頭的連接過程。 [T4 RNA連接酶2]

組分

組分名稱 數(shù)量
T4 RNA Ligase2, truncated K227Q (200 U/μl) 20 μl/100 μl
10×T4 RNA Ligase Buffer 500 μl
50% PEG 8000 500 μl

應(yīng)用

將預(yù)腺苷化的DNA或RNA序列連接到任何RNA的3’末端
將單鏈腺苷化引物連接至小RNA上，用于cDNA文庫構(gòu)建
將單鏈腺苷化引物連接至RNA上，用于鏈特異性cDNA文庫構(gòu)建

活性定義

200單位指在標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系，25℃反應(yīng)條件下，1h能將80%的31-merRNA連接到預(yù)腺苷化的17-merDNA末端所需的酶量。

儲存

-20℃可保存3年。

使用注意事項(xiàng)

1. 1× T4 RNA Ligase Buffer：50mM Tris-HCl pH 7.5，10mM MgCl2，1mM DTT。該酶反應(yīng)時(shí)不需要ATP。
2. 反應(yīng)溫度37℃，65℃ 10min可使該酶失活。
3. 該酶的連接接頭需要5’-預(yù)腺苷化，不能連接磷酸化底物。
4. 該酶不能連接雙鏈DNA或RNA。
5. 加入終濃度5~10% PEG 8000可提高連接效率。