Taq DNA 連接酶是一種熱穩(wěn)定性連接酶，能夠催化磷酸二酯鍵的形成，使與同一互補(bǔ)靶 DNA 鏈雜交的兩條相鄰寡核苷酸鏈的 5´-磷酸末端和 3´-羥基末端通過(guò)磷酸二酯鍵相連。Taq DNA 連接酶催化的連接反應(yīng)只有當(dāng)兩條寡核苷酸鏈與互補(bǔ)靶 DNA 完全配對(duì)，并且兩條寡核苷酸鏈之間沒(méi)有空隙的條件下才可發(fā)生。因此，可以用它來(lái)檢測(cè)單堿基替換。在 45℃-65℃ 范圍內(nèi)，Taq DNA 連接酶均有活性。

組分

組分名稱 數(shù)量
Taq DNA Ligase (40 U/μl) 25 μl/250 μl
10×HiFI Taq Ligase Buffer 250 μl/2.5 ml

應(yīng)用

雙鏈DNA切刻的修復(fù)
用于Gibson組裝方法的建立

活性定義

1 單位指 50μl 反應(yīng)體系中，45℃ 條件下，15 分鐘內(nèi)能使 50% 的1μg 經(jīng) BstEII 消化的 λDNA 片段（12 bp 粘性末端）發(fā)生連接所需要的酶量。

儲(chǔ)存

-20℃可保存半年，長(zhǎng)期儲(chǔ)存請(qǐng)置于 -70℃。

1× Taq DNA 連接酶反應(yīng)緩沖液

20 mM Tris-HCl（pH 7.6），25 mM KAc，10 mM Mg(Ac)2，10 mM DTT，1 mM NAD 和 0.1% Triton X-100，45℃ 溫育。 該酶需 NAD+ 作輔因子，在 10× Taq DNA 連接酶緩沖液中已添加 NAD+；為了延長(zhǎng) NAD+ 的半衰期，緩沖液應(yīng)于 -70℃ 貯存。