人CD4+CD25+CD127低表達(dá)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞分選試劑盒 II

產(chǎn)品概述

人CD4+CD25+CD127低表達(dá)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞分選試劑盒 II 是一款用于從人外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs）中分離CD4+CD25+CD127dim/-調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg細(xì)胞）的先進(jìn)試劑盒。該試劑盒采用兩步分選程序，能夠高效、精準(zhǔn)地分離出高純度的Treg細(xì)胞，為免疫學(xué)研究、疾病機(jī)制探索以及細(xì)胞治療開(kāi)發(fā)提供有力支持。

背景知識(shí)

CD127（IL-7受體α鏈）在大多數(shù)成熟T細(xì)胞上表達(dá)，對(duì)T細(xì)胞的增殖和分化起著關(guān)鍵作用。然而，在調(diào)節(jié)性T細(xì)胞上，CD127的表達(dá)缺失，且其表達(dá)水平與FoxP3（調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子）的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。因此，CD127可作為區(qū)分人調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和活化T細(xì)胞的額外標(biāo)志物。利用CD4、CD25和CD127的表達(dá)特征，可以精確地鑒定和分離具有免疫調(diào)節(jié)功能的Treg細(xì)胞。

詳細(xì)分選程序

1. 第一步：非CD4+和CD127高表達(dá)細(xì)胞的去除

• 使用生物素標(biāo)記的抗體混合物和抗生物素微磁珠，對(duì)非CD4+細(xì)胞以及CD127高表達(dá)細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記。

• 通過(guò)磁分離技術(shù)，將這些不需要的細(xì)胞去除，從而得到富含CD4+CD127低表達(dá)細(xì)胞的中間組分。

2. 第二步：CD4+CD25+CD127dim/-調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的陽(yáng)性選擇

• 對(duì)第一步得到的CD4+CD127低表達(dá)細(xì)胞的流穿組分，進(jìn)一步用CD25微磁珠進(jìn)行標(biāo)記。

• 再次利用磁分離技術(shù)，實(shí)現(xiàn)對(duì)CD4+CD25+CD127dim/-調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的陽(yáng)性選擇，最終獲得高純度的Treg細(xì)胞。

下游應(yīng)用

該試劑盒分離得到的CD4+CD25+CD127dim/-調(diào)節(jié)性T細(xì)胞可用于多種下游實(shí)驗(yàn)，包括：

• 表型分析 ：通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)志物的表達(dá)，進(jìn)一步鑒定Treg細(xì)胞的亞群和狀態(tài)。

• 功能驗(yàn)證 ：評(píng)估Treg細(xì)胞對(duì)其他免疫細(xì)胞（如效應(yīng)T細(xì)胞、B細(xì)胞等）的抑制功能，研究其在免疫調(diào)節(jié)中的具體作用機(jī)制。

• 細(xì)胞治療研究 ：為開(kāi)發(fā)基于Treg細(xì)胞的免疫治療策略提供細(xì)胞來(lái)源，探索其在自身免疫疾病、移植排斥反應(yīng)等疾病治療中的應(yīng)用潛力。

試劑盒組成

試劑盒包含分選所需的各類(lèi)試劑和耗材，具體如下：

• 抗體混合物 ：包括針對(duì)CD4、CD25、CD127等特定細(xì)胞表面標(biāo)志物的高特異性抗體，用于精準(zhǔn)標(biāo)記目標(biāo)細(xì)胞或不需要的細(xì)胞。

• 微磁珠 ：與抗體結(jié)合后的微磁珠能夠使標(biāo)記的細(xì)胞在磁場(chǎng)中被捕獲或分離，實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的磁性分選，包括抗生物素微磁珠和CD25微磁珠等。

• 分選柱 ：用于磁分離過(guò)程的專(zhuān)用柱子，如LD或autoMACS?柱用于第一步的去除過(guò)程，MS或autoMACS柱用于第二步的陽(yáng)性選擇過(guò)程。

應(yīng)用儀器

本試劑盒適用于多種常見(jiàn)的細(xì)胞分選儀器，包括但不限于：

• LD或autoMACS?柱 ：用于第一步的去除過(guò)程，實(shí)現(xiàn)非CD4+和CD127高表達(dá)細(xì)胞的去除。

• MS或autoMACS柱 ：用于第二步的陽(yáng)性選擇過(guò)程，對(duì)CD4+CD25+CD127dim/-調(diào)節(jié)性T細(xì)胞進(jìn)行富集和分離。

注意事項(xiàng)

在使用本試劑盒進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，請(qǐng)注意以下事項(xiàng)：

• 樣本準(zhǔn)備 ：確保人PBMCs樣本的新鮮度和質(zhì)量，按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行細(xì)胞分離和處理，以獲得最佳的分選效果。

• 操作規(guī)范 ：嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，特別是在抗體孵育時(shí)間、溫度以及磁分離步驟等方面，遵循推薦的條件，避免因操作不當(dāng)導(dǎo)致細(xì)胞損傷或分選效率降低。

• 安全防護(hù) ：實(shí)驗(yàn)過(guò)程中請(qǐng)佩戴適當(dāng)?shù)膫€(gè)人防護(hù)裝備，如手套、護(hù)目鏡和實(shí)驗(yàn)服等，避免接觸有害化學(xué)物質(zhì)和生物樣本。

通過(guò)本試劑盒的使用，研究人員能夠高效、精準(zhǔn)地分離出人CD4+CD25+CD127dim/-調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，為進(jìn)一步深入研究免疫調(diào)節(jié)機(jī)制、疾病發(fā)生發(fā)展以及開(kāi)發(fā)新型免疫治療策略提供關(guān)鍵的細(xì)胞資源。