產(chǎn)品簡介
HRP（辣根過氧化物酶）是從辣根根部提取的氧化還原酶，可催化過氧化氫（H?O?）對底物的氧化反應(yīng)，生成有色或熒光產(chǎn)物。廣泛應(yīng)用于ELISA、WB、原位雜交及生物傳感器等領(lǐng)域。
產(chǎn)品特點(diǎn)
- 操作簡便：組分齊全，按流程操作即可獲得高品質(zhì)偶聯(lián)抗體
- 高純度HRP：催化效率高，底物反應(yīng)靈敏度提升
- 定向偶聯(lián)技術(shù)：HRP與抗體無自連，偶聯(lián)物均一穩(wěn)定
- 延長臂交聯(lián)劑：消除蛋白質(zhì)空間位阻，確保應(yīng)用效果
標(biāo)記原理
圖示：抗體Fc區(qū)域氨基酸與HRP上特定氨基酸通過交聯(lián)劑定向偶聯(lián)
產(chǎn)品組分
| 產(chǎn)品組分 | 80μg抗體規(guī)格 | 400μg抗體規(guī)格 | 4mg抗體規(guī)格 | 儲(chǔ)存條件 |
|---|
| 活化的HRP | 1管 | 5管 | 5管 | -20℃, 避光 |
| 標(biāo)記緩沖液H | 5 mL | 5 mL | 5 mL | 4℃, 避光 |
| 抗體修飾試劑 | 60 μL | 60 μL | 60 μL×2支 | -20℃, 避光 |
| 50 KD超濾管 | 1套* | 1套* | 1套* | 室溫 |
| 封閉試劑 | 300 μg | 300 μg | 300 μg×4支 | -20℃, 避光 |
| DMSO（溶解封閉試劑） | 50 μL | 50 μL | 200 μL | -20℃, 避光 |
| HRP標(biāo)記抗體保存液 | 1 mL | 1 mL | 5 mL | 2~8℃ |
| 建議標(biāo)記抗體量 | 20~80μg/管
(推薦20μg) | 20~80μg/管
(推薦20μg) | 200~800μg/管
(推薦200μg) | - |
* 超濾管為一次性使用
** 不同規(guī)格按推薦抗體量標(biāo)記效果最佳
標(biāo)記步驟（適用于20~80μg抗體）
按照以下流程操作，可獲得最佳標(biāo)記效果：
抗體超濾濃縮換液
取20μg抗體（純度>90%）加入超濾管，補(bǔ)滿標(biāo)記緩沖液 → 14000×g離心5分鐘，棄濾液（重復(fù)1次去除雜質(zhì)）→ 倒置濾芯，14000×g離心1分鐘收集抗體 → 補(bǔ)標(biāo)記緩沖液調(diào)至1 mg/mL
注：若抗體濃度>2 mg/mL且無雜質(zhì)（如PBS緩沖），直接稀釋至1 mg/mL
抗體修飾
按20μg抗體加0.5μL 抗體修飾試劑 → 混勻 → 37℃反應(yīng)60分鐘
HRP-抗體偶聯(lián)
活化的HRP管加10μL標(biāo)記緩沖液溶解 → 加入修飾后抗體溶液 → 37℃避光反應(yīng)1.5小時(shí)（或4℃過夜）
封閉與純化
300μg封閉試劑 + 30μL DMSO溶解 → 按20μg抗體加0.6μL封閉液 → 37℃避光反應(yīng)30分鐘 → 用50 KD超濾管，標(biāo)記緩沖液超濾3~5次 → 回收純化后的HRP標(biāo)記物
保存
加HRP標(biāo)記抗體保存液調(diào)濃度≥0.2 mg/mL → 4℃避光保存（勿冷凍！有效期≥6個(gè)月）
注意事項(xiàng)
- 關(guān)鍵操作：超濾步驟確保去除雜質(zhì)（如甘油、疊氮鈉）
- DMSO使用：有毒性，操作時(shí)戴手套
- 儲(chǔ)存要求：避光保存標(biāo)注"shading light"的組分
- 適用性：本試劑盒最適合IgG類抗體，特殊抗體（如IgM）需優(yōu)化條件