碘化丙啶 PI 染色液(1mg/ml)
簡(jiǎn)介：
碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一種可以嵌合到雙鏈 DNA 和 RNA 的堿基對(duì)中并與之結(jié)合的熒光染料，無(wú)堿基特異性。碘化丙啶與雙鏈 DNA 結(jié)合后可以產(chǎn)生熒光，并且熒光強(qiáng)度和雙鏈 DNA 的含量成正比。細(xì)胞內(nèi)的 DNA 被 Propidium Iodide 染色后，可以用流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞進(jìn)行 DNA 含量測(cè)定，然后根據(jù)DNA 含量的分布情況，可以進(jìn)行細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的分析。碘化丙啶 PI 染色液(1mg/ml) 主要由 PI、破膜劑等組成，經(jīng)常用于培養(yǎng)的貼壁或懸浮細(xì)胞的細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)， 亦可用于區(qū)分細(xì)胞凋亡和細(xì)胞壞死。
組成：
產(chǎn)品名稱(chēng) | SCE043-1ml | SCE043-10×1ml | Storage |
碘化丙啶PI染色液(1mg/ml) | 1ml | 10×1ml | -20℃,避光 |
說(shuō)明書(shū) | 一份 |
保存條件：
-20℃,避光保存,12個(gè)月有效。
操作步驟(僅供參考)：
1、細(xì)胞樣品的制備：
⑴貼壁細(xì)胞：
① 收集上述細(xì)胞懸液到離心管內(nèi)。
② 4℃離心，使細(xì)胞沉到管底。小心吸取上清并丟棄，可留大約 50 μl 培養(yǎng)液，以免吸走細(xì)胞。
③ 加入約 1ml 提前預(yù)冷的 PBS ，重懸細(xì)胞，并轉(zhuǎn)移至 1.5ml 無(wú)菌離心管。
④ 4℃離心，使細(xì)胞沉到管底。
⑤ 小心吸取上清并丟棄，可留大約 50 μl PBS，以免吸走細(xì)胞。
⑥ 輕輕彈擊離心管底以適當(dāng)分散細(xì)胞，避免細(xì)胞成團(tuán)。
⑵懸浮細(xì)胞：
① 4℃離心，使細(xì)胞沉到管底。
② 小心吸取上清并丟棄，可留大約 50 μl培養(yǎng)液，以免吸走細(xì)胞。
③ 加入約 1ml 提前預(yù)冷的 PBS ，重懸細(xì)胞，并轉(zhuǎn)移至 1.5ml 無(wú)菌離心管。
④ 4℃離心，使細(xì)胞沉到管底。
⑤ 小心吸取上清并丟棄，可留大約 50 μl PBS，以免吸走細(xì)胞。
⑥ 輕輕彈擊離心管底以適當(dāng)分散細(xì)胞，避免細(xì)胞成團(tuán)。
2、細(xì)胞的固定：
加入1ml 冰浴預(yù)冷 70% 乙醇中，輕輕吹打混勻，4℃條件下固定 2h 或更長(zhǎng)時(shí)間。4℃固定 12 ～24h 可能效果更佳。
3、細(xì)胞的清洗：
① 4℃離心，使細(xì)胞沉到管底。
② 小心吸取上清并丟棄，可留大約 50 μl溶液，以免吸走細(xì)胞。
③ 加入約 1ml 提前預(yù)冷的 PBS ，重懸細(xì)胞，并轉(zhuǎn)移至 1.5ml 無(wú)菌離心管。
④ 4℃ 離心，使細(xì)胞沉到管底。
⑤ 小心吸取上清并丟棄，可留大約 50 μl PBS，以免吸走細(xì)胞。
4、PI染色：
在每個(gè)待檢細(xì)胞樣品中加入500 μl配制好的 PI染色工作液，輕輕重懸細(xì)胞沉淀，置于 37 ℃避光水浴 30min 。
檢測(cè)與分析：
用流式細(xì)胞儀在激發(fā)波長(zhǎng) 488nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)紅色熒光，同時(shí)檢測(cè)光散射情況。采用適當(dāng)分析軟件進(jìn)行細(xì)胞 DNA 或 RNA 含量分析和光散射分析。
注意事項(xiàng)：
1、熒光染料都存在淬滅的問(wèn)題，建議染色后盡快檢測(cè)。
2、為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。
3、在為了獲得細(xì)胞沉淀的離心的過(guò)程中，對(duì)于特殊細(xì)胞，如果細(xì)胞沉淀不充分，可以適當(dāng)提高離心力或延長(zhǎng)離心時(shí)間。
4、如果用于組織的細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)，則必須把組織消化后，制備成單細(xì)胞懸液，才可以進(jìn)行檢測(cè)。
5、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
6、本產(chǎn)品僅由于科研，嚴(yán)禁他用。
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