NCIH1105  人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞

基本特性:

種屬來源:人

性別年齡:男性

組織來源:肺

生長特性:懸浮生長

細(xì)胞形態(tài):漂浮的團(tuán)

細(xì)胞規(guī)格:1 X 106cells/T25或1 mL凍存管

培養(yǎng)條件:DMEM/F12 + 0.005 mg/ml Insulin + 0.01g/ml Transferrin+30nM Sodium selenite + 10 nM Hydrocortisone + 10 nM beta-estradiol + extra 2mM L-glutamine + 5% fetal bovine serum + 10% 

一、細(xì)胞基本信息

類型：人小細(xì)胞肺癌貼壁細(xì)胞，規(guī)格通常為1×10 cells/T25培養(yǎng)瓶。

用途：僅用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途，購買需取得有效資質(zhì)。

二、細(xì)胞接收與處理

運(yùn)輸與接收：細(xì)胞以密封培養(yǎng)瓶形式運(yùn)輸，內(nèi)含完全培養(yǎng)液。收到后，用75%酒精噴灑消毒培養(yǎng)瓶，置于超凈臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作。

靜置與觀察：將培養(yǎng)瓶放入37℃、5% CO培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)，鏡下觀察細(xì)胞匯合度：

匯合度＜80%：收集瓶中完全培養(yǎng)液至離心管，向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入6ml完全培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。

匯合度≥80%：需進(jìn)行傳代或凍存（操作見下文）。

注意：若為密封培養(yǎng)瓶，放入培養(yǎng)箱前需擰松瓶蓋，避免氣體膨脹。

三、細(xì)胞培養(yǎng)步驟

（一）復(fù)蘇細(xì)胞

將含1mL細(xì)胞懸液的凍存管置于37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混勻。

將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶（或6cm培養(yǎng)皿），培養(yǎng)過夜后換液并檢查細(xì)胞密度。

（二）細(xì)胞傳代（貼壁細(xì)胞）

當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)80%-90%時(shí)，棄去培養(yǎng)液，加入1-2ml消化液（0.25% Trypsin-0.53mM EDTA），37℃培養(yǎng)箱消化1-2分鐘。

鏡下觀察細(xì)胞大部分變圓脫落后，加入5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化，輕敲培養(yǎng)瓶使細(xì)胞脫落。

收集細(xì)胞懸液，1000RPM離心8-10分鐘，棄上清，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液吹勻。

按1:2比例將細(xì)胞懸液分到新培養(yǎng)瓶中，每瓶補(bǔ)加5-6ml培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。

（三）細(xì)胞凍存

細(xì)胞生長至80%匯合度時(shí)，棄培養(yǎng)液，用PBS清洗1次。

加入1ml 0.25%胰蛋白酶消化液，鏡下觀察細(xì)胞回縮變圓后，加完全培養(yǎng)液終止消化，吹打細(xì)胞并轉(zhuǎn)移至15ml離心管，1000rpm離心5分鐘。

用適量凍存液重懸細(xì)胞，轉(zhuǎn)入凍存管，先置于-20℃ 1.5小時(shí)，再移至-80℃長期保存（無血清凍存液方法需參考特定貨號說明）。

公司出售的產(chǎn)品：

注意事項(xiàng)：

污染防控：細(xì)菌污染：培養(yǎng)液渾濁、變黃，需添加抗生素（如青霉素-鏈霉素），污染嚴(yán)重時(shí)丟棄。

霉菌污染：顯微鏡下可見絲狀/絮狀漂浮物，需徹底消毒培養(yǎng)箱（過氧乙酸擦拭+紫外線照射），污染細(xì)胞立即丟棄。

支原體污染：無明顯外觀變化，需定期用PCR或熒光法檢測，污染后可用支原體清除試劑處理。

操作規(guī)范：收到細(xì)胞后，先檢查包裝完整性及干冰狀態(tài)，鏡檢細(xì)胞形態(tài)并拍照記錄（40x、100x、200x）。

未開封細(xì)胞若污染或活性差（3天內(nèi)反饋），可申請重發(fā)；客戶操作失誤導(dǎo)致問題不重發(fā)。

運(yùn)輸與保存：干冰運(yùn)輸：凍存管含1×10? cells，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或-80℃冰箱。

常溫運(yùn)輸：T25培養(yǎng)瓶，收到后靜置3-4小時(shí)穩(wěn)定狀態(tài)，再換液或傳代。