LL97A (AIMy  人肺成纖維細(xì)胞

 基本特性:

種屬來源:人

性別年齡:男性

組織來源:肺

生長特性:貼壁生長

細(xì)胞形態(tài):成纖維細(xì)胞

細(xì)胞規(guī)格:1 X 106cells/T25或1 mL凍存管

培養(yǎng)條件:F12K + 15% fetal bovine serum37 ℃, 5% CO2

凍存條件:90% FBS + 10% DMSO

傳代方法:1:3傳代, 2-3天傳1代

1. 細(xì)胞系基礎(chǔ)信息

來源與特性

組織來源：人肺成纖維細(xì)胞（正常肺間質(zhì)來源）

細(xì)胞類型：原代細(xì)胞永生化株，保留成纖維細(xì)胞典型特征

分子標(biāo)記：

陽性：Vimentin（+），α-SMA（+/-，可誘導(dǎo)）

陰性：上皮標(biāo)志物（如E-cadherin）

研究價(jià)值

肺纖維化模型：適用于TGF-β通路激活研究

腫瘤微環(huán)境：與肺癌細(xì)胞共培養(yǎng)模擬CAF（癌癥相關(guān)成纖維細(xì)胞）轉(zhuǎn)化

2. 核心研究方向

方向一：纖維化機(jī)制

激活條件：

TGF-β1（5-10 ng/mL）處理72小時(shí)誘導(dǎo)肌成纖維細(xì)胞分化

膠原分泌檢測（羥脯氨酸含量測定）

藥物篩選：

抗纖維化化合物測試（如尼達(dá)尼布、吡非尼酮）

方向二：腫瘤-間質(zhì)互作

共培養(yǎng)系統(tǒng)：

與A549等肺癌細(xì)胞Transwell共培養(yǎng)（孔徑0.4μm）

檢測IL-6、HGF等旁分泌因子（ELISA法）

3. 培養(yǎng)規(guī)范

培養(yǎng)條件

培養(yǎng)基：DMEM/F12 + 10% FBS + 1%抗生素-抗霉菌素

傳代要點(diǎn)：

消化時(shí)間：0.25%胰酶+0.02% EDTA處理3-5分鐘

接種密度：1×10? cells/cm2（接觸抑制敏感）

質(zhì)量控制

必檢項(xiàng)目：

支原體檢測（每月PCR）

衰老標(biāo)志物（β-半乳糖苷酶染色，傳代≤15代）

4. 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)建議

功能驗(yàn)證

收縮實(shí)驗(yàn)：膠原凝膠收縮率測定（3D培養(yǎng)24-48小時(shí)）

遷移能力：劃痕實(shí)驗(yàn)（建議使用Ibidi培養(yǎng)皿

公司出售的產(chǎn)品：

 注意事項(xiàng)：

污染防控：細(xì)菌污染：培養(yǎng)液渾濁、變黃，需添加抗生素（如青霉素-鏈霉素），污染嚴(yán)重時(shí)丟棄。

霉菌污染：顯微鏡下可見絲狀/絮狀漂浮物，需徹底消毒培養(yǎng)箱（過氧乙酸擦拭+紫外線照射），污染細(xì)胞立即丟棄。

支原體污染：無明顯外觀變化，需定期用PCR或熒光法檢測，污染后可用支原體清除試劑處理。

操作規(guī)范：收到細(xì)胞后，先檢查包裝完整性及干冰狀態(tài)，鏡檢細(xì)胞形態(tài)并拍照記錄（40x、100x、200x）。

未開封細(xì)胞若污染或活性差（3天內(nèi)反饋），可申請重發(fā)；客戶操作失誤導(dǎo)致問題不重發(fā)。

運(yùn)輸與保存：干冰運(yùn)輸：凍存管含1×10? cells，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或-80℃冰箱。

常溫運(yùn)輸：T25培養(yǎng)瓶，收到后靜置3-4小時(shí)穩(wěn)定狀態(tài)，再換液或傳代。