SK-N-BE (2)(人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞)
一、細(xì)胞基本屬性 |
細(xì)胞名稱 | SK-N-BE (2)(人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞) |
細(xì)胞別稱 | SK-N-BE2; SKNBE(2); SKNBE-2; SKNBE2; SK-N-BE; SKNBE ;人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 |
商品貨號 | YB-71441HC |
種屬來源 | 人 |
年齡性別 | 2歲,男 |
組織來源 | 腦,神經(jīng)母細(xì)胞瘤,骨髓轉(zhuǎn)移灶 |
生長特性 | 半貼壁(貼壁和懸浮同時存在)生長 |
細(xì)胞形態(tài) | 神經(jīng)母細(xì)胞樣 |
背景簡介 | 1972年11月從一們多次化療及放療的擴(kuò)散性神經(jīng)母細(xì)胞瘤患兒骨髓穿刺物中建立了SK-N-BE(2)神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株。 該細(xì)胞顯示中等水平的多巴胺-β-羥基酶活性。 有報道稱SK-N-BE(2)細(xì)胞的飽和濃度超過1x10^6細(xì)胞/平方厘米。細(xì)胞形態(tài)多樣,有的有長突觸,有的呈上皮細(xì)胞樣。 細(xì)胞會聚集,形成團(tuán)塊并浮起。 |
生物安全等級 | 1 |
細(xì)胞規(guī)格 | 1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝 |
支原體檢測 | 無 |
基因表達(dá)情況 |
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保藏機(jī)構(gòu) | ATCC; CRL-2271 DSMZ; ACC-632 ECACC; 9501181 |
培養(yǎng)基 | 90%DMEM/F-12+10%FBS+PS |
培養(yǎng)條件 | 氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃ |
凍存條件 | 無血清凍存液,液氮儲存 |
倍增時間 | ~36-48 hours |
STR鑒定位點(diǎn) | Amelogenin:X,Y;CSF1PO:10,10;D12S391:18,24;D13S317:11,11;D16S539:9,11;D18S51:16,16;D19S433:12,13;D21S11:30,32.2;D2S1338:17,23;D3S1358:19,19;D5S818:12,12;D6S1043:11,19;D7S820:9,10;D8S1179:13,14;FGA:22,25;Penta E:14,18;TH01:6,7;TPOX:8,11;vWA:18,18; |
二、細(xì)胞培養(yǎng)操作
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考,具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min,棄去上清液,加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中,加入約8 mL培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,使消化液浸潤所有細(xì)胞,棄去消化液,將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
c、按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后裝入無菌離心管中,1000 rpm離心4 min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3) 細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例;
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液,裝入無菌離心管中,1000 rpm條件下離心4 min,棄去上清液,用PBS清洗一遍,棄盡PBS,進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液,使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL,輕輕混勻,每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液,注意凍存管做好標(biāo)識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱,24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
三、培養(yǎng)注意事項(xiàng)
1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。
2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細(xì)胞因子等,確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致,若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題,責(zé)任由 客戶自行承擔(dān)。
3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題,部分細(xì)胞由于溫度 變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正?,F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后,75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。
4. 貼壁細(xì)胞可以消化,懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞,900 rpm-1000 rpm 離心 3 min,棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細(xì)胞,再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min,,用新鮮的完全培養(yǎng)基重懸 細(xì)胞,并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中,置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。
5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。
6. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián)系,告知細(xì)胞 的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。
7. 該細(xì)胞僅供科研使用。
8. 備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請換用按照說明書細(xì)胞培 養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 收到細(xì)胞后第一次傳代建議 1:2 傳代 。
9. 注意: 1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。
關(guān)鍵字: SK-N-BE (2);人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞;
上海鈺博生物科技有限公司是2012年5月由“海歸”組成的創(chuàng)業(yè)團(tuán)隊(duì)與兩個專業(yè)投資機(jī)構(gòu)發(fā)起成立的,以
開發(fā)生產(chǎn)科研試劑和特色檢驗(yàn)產(chǎn)品為方向,經(jīng)過兩年多的努力,已經(jīng)建立了免疫學(xué)和分子生物學(xué)的五個技術(shù)平臺,開發(fā)了ELISA/ELISpot酶聯(lián)免疫試劑盒、重組蛋白、熒光標(biāo)記抗體、四聚體(Tetramer)特異性T細(xì)胞檢測試劑盒、Aimplex流式高通量多因子檢測、microRNA表達(dá)譜分析和功能研究等系列產(chǎn)品和服務(wù),與國內(nèi)外免疫學(xué)、干細(xì)胞、傳染病和腫瘤研究及臨床檢驗(yàn)領(lǐng)域的科學(xué)家們建立了良好的合作關(guān)系,形成了一定的品牌影響力。鈺博生物另建有七大技術(shù)服務(wù)平臺(ELISA定制服務(wù),免疫學(xué)檢測服務(wù)、分子生物學(xué)技術(shù)服務(wù)、蛋白表達(dá)與純化技術(shù)服務(wù)、抗體制備技術(shù)服務(wù)、細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)服務(wù)、整體實(shí)驗(yàn)課題服務(wù)。用專業(yè)的知識、專業(yè)的設(shè)備、專業(yè)的態(tài)度為客戶提供一站式實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)!