維生素B6（Vitamin B6，VB6）試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法100T/96S
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
維生素B6（Vitamin B6）又稱吡哆素，其包括吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺，在體內(nèi)以磷酸酯的形式存在，是一種水溶性維生素，在細(xì)胞中參與多種蛋白質(zhì)和氨基酸的代謝，對(duì)生物體具有極其重要的作用。
測(cè)定原理：
VB6與4-氨基安替比林在強(qiáng)氧化劑作用下生成穩(wěn)定的黃色化合物，在390nm有特征吸收峰。
組成：
產(chǎn)品名稱 | VS004-100T/96S | Storage |
提取液：液體 | 70ml | 4℃ |
試劑一：液體 | 1ml | 4℃ |
試劑二：液體 | 5ml | 4℃ |
試劑三：液體 | 8ml | 4℃避光 |
試劑四：液體 | 8ml | 4℃避光 |
說(shuō)明書(shū) | 一份 |
自備儀器和用品：
天平、研缽、離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋、蒸餾水。
樣本處理：
組織：將樣品磨碎，按照質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入0.6ml提取液）加入提取液，60℃浸提30min，加蒸餾水0.4ml，混勻后于25℃，16000rpm離心10min，取上清測(cè)定（動(dòng)物組織等蛋白含量較高的樣本建議離心20-30分鐘）。
細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入0.6ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；加蒸餾水0.4ml，混勻后于25℃，16000rpm離心10min，取上清測(cè)定。
血清：直接測(cè)定。
測(cè)定操作：
| 空白管 | 測(cè)定管 |
樣品（μl） |
| 40 |
試劑一（μl） | 40 |
|
試劑二（μl） | 40 | 40 |
試劑三（μl） | 60 | 60 |
試劑四（μl） | 60 | 60 |
充分混勻，25℃反應(yīng)20min，于微量石英比色皿/96孔板，測(cè)定390nm處吸光值，記為A空白管和A測(cè)定管，△A=A測(cè)定管-A空白管?？瞻坠苤灰鲆还堋?/p> |
計(jì)算公式：
a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.3635x+0.0205，R2 = 0.9986
1. 按照蛋白含量計(jì)算
VB6含量（μg/mg prot）=（△A - 0.0205）÷ 0.3635×V反總÷（V樣×Cpr）
= 13.76×（△A - 0.0205）÷ Cpr
2. 按照樣本質(zhì)量計(jì)算
VB6含量（μg/g）=（△A - 0.0205）÷ 0.3635×V反總÷（V樣×W÷V樣總）
= 13.76×（△A - 0.0205）÷ W
3. 按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
VB6含量（μg/104 cell）=（△A - 0.0205）÷ 0.3635×V反總÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）
= 13.76×（△A - 0.0205）÷ 細(xì)胞數(shù)量
4. 按照液體體積計(jì)算
VB6含量（μg/ml）=（△A - 0.0205）÷ 0.3635×V反總÷V樣
= 13.76×（△A - 0.0205）
V反總：反應(yīng)總體積，0.2ml；：V樣：加入樣本體積，0.04ml；V樣總：加入提取液體積，1ml； Cpr：蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g
b．用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.1818x+0.0205，R2 = 0.9986
1. 按照蛋白含量計(jì)算
VB6含量（μg/mg prot）=（△A - 0.0205）÷ 0.1818×V反總÷（V樣×Cpr）
= 27.52×（△A - 0.0205）÷ Cpr
2. 按照樣本質(zhì)量計(jì)算
VB6含量（μg/g）=（△A - 0.0205）÷ 0.1818 ×V反總÷（V樣×W÷V樣總）
= 27.52×（△A - 0.0205）÷ W
3. 按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
VB6含量（μg/104 cell）=（△A - 0.0205）÷ 0.1818×V反總÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）
= 27.52×（△A - 0.0205）÷ 細(xì)胞數(shù)量
4. 按照液體體積計(jì)算
VB6含量（μg/ml）=（△A - 0.0205）÷ 0.1818×V反總÷V樣
=27.52×（△A - 0.0205）
V反總：反應(yīng)總體積，0.2ml；：V樣：加入樣本體積，0.04ml；V樣總：加入提取液體積，1ml； Cpr：蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g
注意事項(xiàng)：
若測(cè)定結(jié)果中吸光值超過(guò)1，請(qǐng)將樣本稀釋后進(jìn)行測(cè)定，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
蛋白濃度較高的樣品，比如動(dòng)物組織，若顯色完成后有沉淀產(chǎn)生，將樣本稀釋后再測(cè)定，在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
顯色完成后立即進(jìn)行測(cè)定。
關(guān)鍵字： 維生素B6（VB6）檢測(cè)試劑盒 ;
伊勢(shì)久（江蘇連云港）生物科技有限責(zé)任公司，成立于2019年，坐落于新亞歐大陸橋東方橋頭堡連云港市。公司由資深行業(yè)專家和雙一流高校博士聯(lián)合創(chuàng)辦，主要從事生化檢測(cè)、病理檢測(cè)和原料酶等相關(guān)試劑的研發(fā)和生產(chǎn)。
我司位于聯(lián)東U谷科技創(chuàng)新谷內(nèi)的2000平米的生產(chǎn)、研發(fā)基地已建成投入運(yùn)行，其中包括150平米的超十萬(wàn)級(jí)的潔凈車(chē)間。我司堅(jiān)持以自主研發(fā)為核心，現(xiàn)已生產(chǎn)出的脲酶、tRNA轉(zhuǎn)運(yùn)核糖核酸、刀豆球蛋白、胰蛋白酶抑制劑等產(chǎn)品，熱銷(xiāo)市場(chǎng)以來(lái)收到了客戶的廣泛好評(píng)。
公司秉承“ 摯誠(chéng)科研、匠心傳承” 的發(fā)展理念，聚焦于前沿生物技術(shù)的應(yīng)用和創(chuàng)新，努力成為生物科技領(lǐng)域的標(biāo)桿企業(yè)。堅(jiān)持以客戶為中心，致力于為中國(guó)的科研工作者提供高品質(zhì)的產(chǎn)品和專業(yè)服務(wù)，始終是我們努力的目標(biāo)和方向。