【產(chǎn)品名稱】
商品名稱：弓形蟲PCR檢測試劑盒
【包裝規(guī)格】25T/盒、50T/盒
【檢驗原理】本試劑盒采用TaqMan 探針法實時熒光PCR 技術(shù)，根據(jù)弓形蟲基因設計特異性引物和熒光探針，用熒光PCR技術(shù)對弓形蟲的核酸進行體外擴增檢測，用于臨床上對可疑感染病料的病原學診斷。
【試劑組成】
包裝規(guī)格 | 25T/盒 | 50T/盒 |
PCR反應液 | 500 μL×1管 | 1000 μL×1管 |
陽性對照 | 40 μL×1管 | 40 μL×1管 |
陰性對照 | 40 μL×1管 | 40 μL×1管 |
說明書 | 1份 | 1份 |
說明：不同批號的試劑盒組分不可交互使用
【儲存條件及有效期】
避光-20℃以下保存，避免反復凍融，有效期12個月。
【適用儀器】 ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道實時熒光定量PCR儀。
【產(chǎn)品展示】
【檢驗方法】
1. 試劑準備（試劑準備區(qū)）
（1）從冰箱中取出試劑盒, 從試劑盒中取出實驗所需試劑，充分融化混勻并瞬時離心以去除管壁附著液體。
（2）核算當次實驗所需要的反應數(shù)（n），并根據(jù)如下表所示反應體系計算當次實驗所需要的各種試劑量。
n =陰性對照數(shù)（1T）+陽性對照數(shù)（1T）+誤差預留量（1T）+樣本數(shù)
單反液配制表(每份) | PCR反應液（UNG酶及Taq酶） | 20 μL |
（3）在無菌離心管中加入上述試劑，充分混勻后瞬時離心。按照20μL/管分裝量將試劑分裝至PCR反應管。
（4）蓋緊PCR反應管蓋后將PCR反應管轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。剩余試劑放回-20℃以下冰箱冷凍保存。
2.樣本準備（樣本處理區(qū)）
用DNA/RNA提取試劑盒提取核酸即可，具體操作按照其試劑盒說明書
3.加樣
在上述制備好的PCR反應樣本管中分別加入處理好的待測標本DNA各5 μl、終體積25 μl/管，蓋好PCR反應蓋混勻后瞬時低速離心，轉(zhuǎn)移到PCR儀器上。陰性對照和陽性對照管則各加5 μL試劑盒自帶的陰性對照或陽性對照品，終體積為25 μl/管，蓋好PCR反應蓋混勻后瞬時低速離心，轉(zhuǎn)移到PCR儀器上。
4.PCR（PCR擴增區(qū)）
（1）取樣本處理區(qū)準備好的PCR反應管，放置在實時熒光定量PCR儀樣品槽相應位置，并記錄放置順序。
（2）按下表設置儀器核酸擴增相關(guān)參數(shù)進行PCR擴增。
反應體積 | 25 μL | 通道選擇 | FAM通道采集弓形蟲熒光信號 |
PCR 反應 條件 | 步驟 | 條件 | 循環(huán)數(shù) |
UNG處理 | 37℃：2分鐘（min） | 1 |
預變性 | 95℃：3分鐘（min） | 1 |
PCR擴增 | 95℃：5秒（s） | 40 |
55℃：40秒（s） （此階段結(jié)束時采集熒光信號） |
注：ABI系列熒光PCR儀在設置時不選ROX校正，設置淬滅基團選擇None。
【注意事項】
1.使用本試劑盒的實驗室，應嚴格按照國家有關(guān)部分頒布的有關(guān)基因擴增檢驗實驗室管理規(guī)范進行管理；
2.為避免RNA降解，樣本處理過程應在0-4℃條件下操作，且完成實驗后立即上機檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應經(jīng)過無核酶處理；
3.各區(qū)域物品均為專用，不得交叉使用，以免污染；檢測結(jié)束后，應立即對工作臺清潔；
4.吸取反應液時，應盡量避免產(chǎn)生氣泡；上 PCR 儀前，應注意檢查各反應管是否蓋緊，以免液體蒸發(fā)造成結(jié)果不準確；
5.試劑盒所有試劑在使用前應該在常溫下充分融化混勻，并應瞬時離心；
6.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在第一次使用前應全部轉(zhuǎn)移至標本準備區(qū)，并單獨存放；
7.為防止熒光干擾，應避免裸手直接接觸PCR反應管，并應避免在PCR反應管上進行任何標記；
8.檢測過程中使用過的吸頭，應直接打到盛有 10%次氯酸的廢物缸內(nèi)，檢測結(jié)束的PCR 反應管，切忌開蓋，并與其他廢棄物品一同滅菌后丟棄；工作臺及各種實驗用品應定期用 10%次氯酸、75%酒精或紫外燈進行消毒；
9.儀器擴增相關(guān)參數(shù)應按照本說明書相關(guān)要求進行設置；不同批號試劑不能混用；并在有效期內(nèi)使用。
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