【產品名稱】
商品名稱：柯薩奇病毒CA16型(CAV-16)PCR檢測試劑盒
【包裝規(guī)格】25T/盒、50T/盒
【檢驗原理】本試劑盒采用TaqMan 探針法實時熒光PCR 技術，根據(jù)柯薩奇病毒CA16型(CAV-16)基因設計特異性引物和熒光探針，用熒光PCR技術對柯薩奇病毒CA16型(CAV-16)的核酸進行體外擴增檢測，用于臨床上對可疑感染病料的病原學診斷。
【試劑組成】
包裝規(guī)格 | 25T/盒 | 50T/盒 |
反應液 | 500μL×1 管 | 500μL×2 管 |
酶液 | 25μL×1 管 | 50μL×1 管 |
陽性質控品 | 250μL ×1 管 | 250μL ×1 管 |
陰性質控品 | 250μL ×1 管 | 250μL ×1 管 |
說明：不同批號的試劑盒組分不可交互使用
【儲存條件及有效期】
-20℃±5℃，避光保存、運輸、反復凍融次數(shù)不超過 5 次，有效期 12 個月。
【適用儀器】 ABI7500、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。
【使用方法】
1.樣品處理（樣本處理區(qū)）
核酸提取 推薦采用核酸提取或純化試劑（磁珠法或離心柱法）進行核酸提取， 請按照試劑說明書進行操作。
2.試劑配制（試劑準備區(qū)） 根據(jù)待檢測樣本總數(shù)，設所需要的 PCR 反應管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照；反應管數(shù) 每滿 10 份，多配制 1 份)，每測試反應體系配制如下表：
試劑 | 反應液 | 酶液 |
用量（樣本數(shù)為 N） | 19μL | 1μL |
將混合好的測試反應液分裝到 PCR 反應管中，20μL/管。
3.加樣（樣本處理區(qū)） 將步驟 1 提取的核酸、陽性質控品、陰性質控品各取 5μL，分別加入相應的反應管中，蓋好管蓋，混勻， 短暫離心。
4.PCR 擴增（核酸擴增區(qū)）
2.1 將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內；
2.2 設置好通道、樣品信息，反應體系設置為 25μL； 熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM，淬滅通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列儀器請勿選擇 ROX 參比熒光，選擇 None 即可。
2.3 推薦循環(huán)參數(shù)設置：
步驟 | 循環(huán)數(shù) | 溫度 | 時間 | 收集熒光信號 |
1 | 1 cycle | 95℃ | 2min | 否 |
2 | 45cycles | 95℃ | 15sec | 否 |
60℃ | 30sec | 是 |
5.結果分析判定
5.1結果分析條件設定（請參照各儀器使用說明書進行設置，以分析 ABI7500 儀器為例） 反應結束后自動保存結果，根據(jù)分析后圖像調節(jié) Baseline 的 Start 值、End 值以及 Threshold 值（用戶可根 據(jù)實際情況自行調整，Start 值可設在 3～15、End 值可設在 5～20，使閾值線位于擴增曲線指數(shù)期，陰性質控 品的擴增曲線平直或低于閾值線），點擊 Analyze 自動獲得分析結果。
5.2結果判斷
陽性：檢測通道 Ct 值≤40，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線；
陰性：樣本檢測結果無 Ct 值，且無特異性擴增曲線；
可疑：樣本檢測結果 40＜Ct 值≤45，建議重復檢測，如果檢測通道仍為 40值≤45，且曲線有明顯的增長 曲線，判定為陽性，否則為陰性。
5.3 質控標準 陰性質控品：無特異性擴增曲線或無 Ct 值顯示； 陽性質控品：擴增曲線有明顯指數(shù)增長期，且 Ct 值≤32； 以上條件應同時滿足，否則實驗視為無效。
3. 檢測方法的局限性
1. 樣本檢測結果與樣本收集、處理、運送以及保存質量有關；
2. 樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現(xiàn)假陽性結果；
3. 陽性對照、擴增產物泄漏，會導致假陽性結果；
4. 病原體在流行過程中基因突變、重組，會導致假陰性結果；
5. 不同的提取方法存在提取效率差異，會導致假陰性結果；
6. 試劑運輸，保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準確的結果；
7. 本檢測結果僅供參考，如須確診請結合臨床癥狀以及其他檢測手段。
【注意事項】
1.所有操作嚴格按照說明書進行；
2.試劑盒內各種組分使用前應自然融化，完全混勻并短暫離心；
3.反應液應避光保存；
4.反應中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；
5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服；
6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進行，以免交叉污染；
7.實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器；
8.試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照《微生物生物醫(yī)學實驗室生物安全通則》進行處理。
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