幾丁質(zhì)酶（Chitinase）試劑盒說明書
微量法 100管/48樣
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
幾丁質(zhì)主要存在于蝦、蟹、昆蟲等甲殼類動(dòng)物的外殼與軟體動(dòng)物的器官(例如烏賊的軟骨)，以及真菌類的細(xì)胞壁中。而幾丁質(zhì)酶(EC 3.2.1.14)可催化幾丁質(zhì)水解，具有抵御真菌侵染的作用，成為抗真菌病害的研究熱點(diǎn)。
測(cè)定原理：
幾丁質(zhì)酶水解幾丁質(zhì)產(chǎn)生N-乙酰氨基葡萄糖，進(jìn)一步與對(duì)二甲氨基苯甲醛產(chǎn)生紅色化合物，在585nm處有特征吸收峰，吸光值增加速率反映了幾丁質(zhì)酶的活性。
組成：
產(chǎn)品名稱 | GMS053-100T/48S | Storage |
提取液：液體 | 105ml | 4℃ |
試劑一：液體 | 5ml | 4℃ |
試劑二：液體 | 5ml | 4℃ |
試劑三：液體 | 5ml | 4℃ |
試劑四：液體 | 10ml | 4℃避光 |
說明書 | 一份 |
試劑二：液體5ml×1瓶，4℃保存。（若出現(xiàn)結(jié)晶，可80℃左右加熱溶解后使用）
自備儀器和用品：
天平、水浴鍋、離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、甲苯（土壤樣品專用）和蒸餾水。
粗酶液提?。?/span>
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后10000g，4℃離心20min，取上清，置冰上待測(cè)。
真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后10000g，4℃，離心20min，取上清置于冰上待測(cè)。
培養(yǎng)液：直接測(cè)定。
測(cè)定操作表：
| 對(duì)照管 | 測(cè)定管 |
粗酶液（μl） | 80 | 80 |
提取液（μl） | 120 | 40 |
試劑一（μl） |
| 80 |
混勻，37℃水浴1h |
試劑二（μl） | 40 | 40 |
混勻，沸水浴7min，5000rpm，4℃，離心10min，取上清200μl。 |
試劑三（μl） | 40 | 40 |
試劑四（μl） | 80 | 80 |
混勻，37℃，15min，于微量石英比色皿/96孔板，測(cè)定A585，ΔA=A測(cè)定-A對(duì)照。 |
計(jì)算公式：
用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.3088-0.003，R2=0.9995
計(jì)算公式：
按照樣本重量計(jì)算
酶活性定義：37℃條件下，每克組織每小時(shí)分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個(gè)酶活性單位。
幾丁質(zhì)酶活性（mg/h/g鮮重）=（ΔA+0.003）÷0.3088×V反總÷(V樣÷V樣總×W) ÷T
=8.096×（ΔA +0.003）÷W
按照蛋白質(zhì)濃度計(jì)算
酶活定義：37℃條件下，每毫克蛋白每小時(shí)分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個(gè)酶活單位。
幾丁質(zhì)酶活性（mg/h mg prot）=（ΔA+0.003）÷0.3088×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T
= 8.096×（ΔA +0.003）÷Cpr
按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活定義：37℃條件下，每104個(gè)細(xì)胞每小時(shí)分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個(gè)酶活單位。
幾丁質(zhì)酶活性（mg/h /104 cell）=（ΔA+0.003）÷0.3088×V反總÷(V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量)
=8.096×（ΔA +0.003）÷細(xì)胞數(shù)量
4、按液體體積計(jì)算
酶活定義：37℃條件下，每毫升培養(yǎng)液每小時(shí)分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個(gè)酶活單位。
幾丁質(zhì)酶活性（mg/h /ml）=（ΔA+0.003）÷0.3088×V反總÷V樣=8.096×（ΔA +0.003）
V反總：反應(yīng)體系總體積，1ml；V樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0.4ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml
用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.1544x-0.003，R2=0.9995
計(jì)算公式：
按照樣本重量計(jì)算
酶活性定義：37℃條件下，每克組織每小時(shí)分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個(gè)酶活性單位。
幾丁質(zhì)酶活性（mg/h/g鮮重）=（ΔA+0.003）÷0.1544×V反總÷(V樣÷V樣總×W) ÷T
=16.192×（ΔA +0.003）÷W
按照蛋白質(zhì)濃度計(jì)算
酶活定義：37℃條件下，每毫克蛋白每小時(shí)分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個(gè)酶活單位。
幾丁質(zhì)酶活性（mg/h mg prot）=（ΔA+0.003）÷0.3088×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T
= 16.192×（ΔA +0.003）÷Cpr
按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活定義：37℃條件下，每104個(gè)細(xì)胞每小時(shí)分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個(gè)酶活單位。
幾丁質(zhì)酶活性（mg/h /104 cell）=（ΔA+0.003）÷0.3088×V反總÷(V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量)
=16.192×（ΔA +0.003）÷細(xì)胞數(shù)量
4、按液體體積計(jì)算
酶活定義：37℃條件下，每毫升培養(yǎng)液每小時(shí)分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個(gè)酶活單位。
幾丁質(zhì)酶活性（mg/h /ml）=（ΔA+0.003）÷0.3088×V反總÷V樣=16.192×（ΔA +0.003）
V反總：反應(yīng)體系總體積，1ml；V樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0.4ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml
注意事項(xiàng)：
反應(yīng)結(jié)束后立即進(jìn)行比色。
試劑四有一定的毒性，請(qǐng)操作時(shí)做好防護(hù)措施。
關(guān)鍵字： 幾丁質(zhì)酶檢測(cè)試劑盒;
伊勢(shì)久（江蘇連云港）生物科技有限責(zé)任公司，成立于2019年，坐落于新亞歐大陸橋東方橋頭堡連云港市。公司由資深行業(yè)專家和雙一流高校博士聯(lián)合創(chuàng)辦，主要從事生化檢測(cè)、病理檢測(cè)和原料酶等相關(guān)試劑的研發(fā)和生產(chǎn)。
我司位于聯(lián)東U谷科技創(chuàng)新谷內(nèi)的2000平米的生產(chǎn)、研發(fā)基地已建成投入運(yùn)行，其中包括150平米的超十萬級(jí)的潔凈車間。我司堅(jiān)持以自主研發(fā)為核心，現(xiàn)已生產(chǎn)出的脲酶、tRNA轉(zhuǎn)運(yùn)核糖核酸、刀豆球蛋白、胰蛋白酶抑制劑等產(chǎn)品，熱銷市場(chǎng)以來收到了客戶的廣泛好評(píng)。
公司秉承“ 摯誠科研、匠心傳承” 的發(fā)展理念，聚焦于前沿生物技術(shù)的應(yīng)用和創(chuàng)新，努力成為生物科技領(lǐng)域的標(biāo)桿企業(yè)。堅(jiān)持以客戶為中心，致力于為中國的科研工作者提供高品質(zhì)的產(chǎn)品和專業(yè)服務(wù)，始終是我們努力的目標(biāo)和方向。