乳酸脫氫酶（Lactate Dehydrogenase，LDH）試劑盒說明書
微量法 100管/48樣
正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
LDH（EC 1.1.1.27）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，是糖酵解途徑的末端酶，催化丙酮酸與乳酸之間的可逆反應，伴隨著NAD+/NADH之間互變。
測定原理：
LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸進一步與2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在堿性溶液中顯棕紅色，顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。
組成：
產品名稱 | CE004-100T/48S | Storage |
提取液： | 60ml | 4℃ |
試劑一：液體 | 5ml | 4℃ |
試劑二：粉劑 | 1支 | -20℃ |
試劑三：液體 | 5ml | 4℃ |
試劑四：液劑 | 20ml | 4℃ |
試劑五：液體 | 100μl | 4℃ |
說明書 | 一份 |
試劑二：粉劑×1支，-20℃保存，用時加入10μl試劑五和1.3 ml蒸餾水充分溶解備用，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融；
自備儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
樣品測定的準備：
1、細菌、細胞或組織樣品的制備：
細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104個）：提取液體積（ml）為1000~5000：1的比例（建議2000萬細菌或細胞加入1ml提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟：
分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節(jié)波長至450nm，蒸餾水調零。
2、樣本測定（在EP管中加入下列試劑）
試劑名稱(μl) | 測定管 | 對照管 |
樣本 | 10 | 10 |
試劑一 | 50 | 50 |
試劑二 | 10 |
|
蒸餾水 |
| 10 |
充分混勻，37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）準確水浴15min
充分混勻，37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）準確水浴15min
充分混勻，室溫靜置15min， 450 nm下測定吸光度，計算ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管需要設一個對照管
LDH活力單位的計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、標準條件下測定的回歸曲線， y = 0.9108x+0.0037 (x為標準品濃度，umol/ml；y為ΔA)。
2、血清（漿）LDH活力的計算
單位的定義：每ml血清（漿）每分鐘催化產生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。
LDH（nmol/min/ml）=（ΔA-0.0037）÷0.9108÷T×103=73.2×ΔA
3、細胞、細菌和組織中LDH活力的計算
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產生1 nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。
LDH（nmol/min/mg prot）=[（ΔA-0.0037）÷0.9108×V1]÷(V1×Cpr)÷T×103 =73.2×ΔA÷Cpr
需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質含量測定試劑盒。
（2） 按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘催化產生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。
LDH（nmol/min/g鮮重）=[（ΔA-0.0037）÷0.9108×V1]÷(W×V1÷V2)÷T×103 =73.2×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘催化產生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。
LDH（nmol/min/104 cell）= [（ΔA-0.0037）÷0.9108×V1]÷(2000×V1÷V2)÷T×103 =0.037×ΔA
V1：加入反應體系中樣本體積，0.01ml；V2：加入提取液體積，1 ml；T：反應時間，15 min；Cpr：蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本質量，g；2000：細胞或細菌總數，2000萬；103：1umol/ml=103 nmol/ml。
b.使用96孔板測定的計算公式如下：
1、標準條件下測定的回歸曲線， y = 0.4554x+0.0037 (x為標準品濃度，umol/ml；y為ΔA)。
2、血清（漿）LDH活力的計算
單位的定義：每ml血清（漿）每分鐘催化產生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。
LDH（nmol/min/ml）=（ΔA-0.0037）÷0.4554÷T×103=146.4×（ΔA-0.0037）
3、細胞、細菌和組織中LDH活力的計算
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產生1 nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。
LDH（nmol/min/mg prot）=[（ΔA-0.0037）÷0.4554×V1]÷(V1×Cpr)÷T×103 =146.4×（ΔA-0.0037）÷Cpr
需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質含量測定試劑盒。
（2） 按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘催化產生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。
LDH（nmol/min/g鮮重）=[（ΔA-0.0037）÷0.4554×V1]÷(W×V1÷V2)÷T×103 =146.4×（ΔA-0.0037）÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘催化產生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。
LDH（nmol/min/104 cell）= [（ΔA-0.0037）÷0.4554×V1]÷(2000×V1÷V2)÷T×103 =0.073×（ΔA-0.0037）
V1：加入反應體系中樣本體積，0.01ml；V2：加入提取液體積，1 ml；T：反應時間，15 min；Cpr：蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本質量，g；2000：細胞或細菌總數，2000萬；103：1umol/ml=103 nmol/ml。
標準曲線線性范圍為：0.1 umol/ml -2 umol/ml。
ΔA線性范圍為：0.01 -1。
關鍵字： 乳酸脫氫酶（LDH）檢測試劑盒;
伊勢久（江蘇連云港）生物科技有限責任公司，成立于2019年，坐落于新亞歐大陸橋東方橋頭堡連云港市。公司由資深行業(yè)專家和雙一流高校博士聯(lián)合創(chuàng)辦，主要從事生化檢測、病理檢測和原料酶等相關試劑的研發(fā)和生產。
我司位于聯(lián)東U谷科技創(chuàng)新谷內的2000平米的生產、研發(fā)基地已建成投入運行，其中包括150平米的超十萬級的潔凈車間。我司堅持以自主研發(fā)為核心，現(xiàn)已生產出的脲酶、tRNA轉運核糖核酸、刀豆球蛋白、胰蛋白酶抑制劑等產品，熱銷市場以來收到了客戶的廣泛好評。
公司秉承“ 摯誠科研、匠心傳承” 的發(fā)展理念，聚焦于前沿生物技術的應用和創(chuàng)新，努力成為生物科技領域的標桿企業(yè)。堅持以客戶為中心，致力于為中國的科研工作者提供高品質的產品和專業(yè)服務，始終是我們努力的目標和方向。