BEL-7405 (人肝癌細胞)
產品信息
| 名稱 | BEL-7405 (人肝癌細胞) |
| 別稱 | Bel-7405; BEL 7405; Bel 7405; BEL7405 |
| 種屬 | 人 |
| 年齡（性別） | 女 |
| 組織來源 | 肝癌 |
| 生長特性 | 貼壁細胞 |
| 細胞形態(tài) | 上皮細胞樣 |
| 生長培養(yǎng)基 | RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S |
| 推薦換液頻率 | 2~3次/周 |
| 凍存條件 | 凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO溫度：液氮 |
| 培養(yǎng)條件 | 氣相：空氣，95%；CO2，5%溫度：37℃ |
二、細胞接收后的處理
1) 收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于室溫放置約1h，若發(fā)現培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。
2) 請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據。
3) 貼壁細胞：細胞在室溫中放置1h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
4) 細胞運輸途中脫落操作方法：把脫落的細胞收集離心后棄上清，用PBS清洗一遍，離心棄上清，在離心管中加入1ml胰酶吹散消化20秒左右，加完全培養(yǎng)基終止消化后離心重新鋪平，剩下的貼壁細胞就按照正常貼壁細胞傳代方法操作。
5) 備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。 收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。
三、細胞培養(yǎng)操作
1) 復蘇細胞：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產品說明書為主
將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL完全培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第三天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
a) 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
b) 加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02%EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 -3min（視細胞消化情況而定），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml完全培養(yǎng)基終止消化。
c) 輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。
d) 將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
貼壁細胞傳代注意點：
l 一定要PBS洗一遍。
l 細胞多觀察幾次掌握時間，不要在細胞沒有基本脫落就終止消化然后吹打下來，這樣細胞 更容易分化和死亡。
l 不要一直對細胞吹打
3) 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a) 收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數。
b) 根據細胞數量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度1×10^6~1×10^7/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。
c) 將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
四、培養(yǎng)注意事項
1) 細胞出現問題，予以重發(fā)情況
a) 細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液等，重發(fā)；
b) 細胞污染問題，請在收到產品3 天內，給我們提出真實的實驗結果，核實后重發(fā)；
c) 常溫發(fā)貨的細胞靜置2小時后，干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇后2 天后，絕大多數細胞未存活，（需提供真實清晰的細胞狀態(tài)照片），重發(fā)；
d) 干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇后2天后或常溫發(fā)貨的細胞靜置2 小時候并且未開封，出現污染，重發(fā)；
e) 細胞活性問題，請在收到產品7天內給我們提出真實的實驗結果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，和每天的細胞照片，核實后予重發(fā)；
f) 細胞收到當天以及第2,3 天請拍照，3 天未告知的，視為產品合格。4-7 天內出現問題需提供收到細胞前3天照片和細胞出現問題的照片以及細胞相關操作的詳細步驟，并跟技術人員溝通的，由技術人員判定為我方責任的，重發(fā)。
2) 細胞出現問題，不予以重發(fā)的情況
a) 客戶操作造成細胞污染，不重發(fā)；
b) 客戶嚴重操作失誤致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
c) 非我們推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
d) 細胞狀態(tài)不好，未提供真實清晰的培養(yǎng)前3 天的細胞狀態(tài)照片，不重發(fā)；
e) 細胞培養(yǎng)時經其它處理導致細胞出現問題的，不重發(fā)；
f) 收到細胞并發(fā)現問題與客服人員溝通的時間證明大于7 天的，不重發(fā)；
g) 視具體情況而定
五、注意事項
1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
2. 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產生飛揚的碎屑造成人員傷害。
3. 該細胞僅供科研使用！說明書僅供參考以實際到貨說明書為準！
關鍵字： BEL-7405;人肝癌細胞;
上海鈺博生物科技有限公司是2012年5月由“海歸”組成的創(chuàng)業(yè)團隊與兩個專業(yè)投資機構發(fā)起成立的，以
開發(fā)生產科研試劑和特色檢驗產品為方向，經過兩年多的努力，已經建立了免疫學和分子生物學的五個技術平臺，開發(fā)了ELISA/ELISpot酶聯免疫試劑盒、重組蛋白、熒光標記抗體、四聚體(Tetramer)特異性T細胞檢測試劑盒、Aimplex流式高通量多因子檢測、microRNA表達譜分析和功能研究等系列產品和服務，與國內外免疫學、干細胞、傳染病和腫瘤研究及臨床檢驗領域的科學家們建立了良好的合作關系，形成了一定的品牌影響力。鈺博生物另建有七大技術服務平臺（ELISA定制服務，免疫學檢測服務、分子生物學技術服務、蛋白表達與純化技術服務、抗體制備技術服務、細胞培養(yǎng)技術服務、整體實驗課題服務。用專業(yè)的知識、專業(yè)的設備、專業(yè)的態(tài)度為客戶提供一站式實驗技術服務！