NR8383 [AgC11x3A; NR8383.1]（大鼠肺泡巨噬細(xì)胞）
| 一、細(xì)胞基本屬性 |
細(xì)胞名稱 | NR8383 [AgC11x3A; NR8383.1]（大鼠肺泡巨噬細(xì)胞） |
細(xì)胞別稱 | NR-8383; NR 8383; NR8383.1; AgC11x3A; Normal Rat, August 3, 1983 |
商品貨號 | YB-73172RC |
種屬來源 | 大鼠 |
年齡性別 |
|
組織來源 | 肺；巨噬細(xì)胞；肺泡 |
生長特性 | 半貼壁生長 |
細(xì)胞形態(tài) | 巨噬細(xì)胞 |
背景簡介 | NR8383 (正常大鼠，1983年)來源于肺灌洗時的正常大鼠肺泡巨噬細(xì)胞。細(xì)胞在gerbil肺細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)液存在下培養(yǎng)了大約8-9個月。隨后，不再需要外源生長因子。通過有限稀釋法從單個細(xì)胞克隆并亞克隆NR8383細(xì)胞，并三次用軟瓊脂亞克隆。細(xì)胞表現(xiàn)出巨噬細(xì)胞的特性，吞噬酵母多糖和銅綠，非特異性脂酶活性，F(xiàn)c受體，氧化降解；分泌IL-1, TGF-β和IL-6，可重復(fù)地響應(yīng)外源生長因子。 NR8383細(xì)胞響應(yīng)博萊霉素，分泌TGF-β前體。在博萊霉素刺激下，TGF –β mRNA表達(dá)也上升。細(xì)胞對內(nèi)毒素敏感。1-10 鈉克/毫升的LPS水平抑制增生達(dá)50%。 即使達(dá)到0.001毫克/毫升的水平，LPS抑制還是無毒且在后續(xù)過程中可逆的。NR8383細(xì)胞株提供了高響應(yīng)的肺泡巨噬細(xì)胞的均一來源，可以用于體外研究巨響細(xì)胞相關(guān)活性。 |
生物安全等級 | 1 |
細(xì)胞規(guī)格 | 1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝 |
支原體檢測 | 無 |
基因表達(dá)情況 | transforming growth factor beta (TGF beta); interleukin 1 (IL-1); interleukin 6 (IL-6) |
保藏機構(gòu) | ATCC; CRL-2192 |
培養(yǎng)基 | 85%F12K+15% FBS+PS |
培養(yǎng)條件 | 氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃ |
凍存條件 | 無血清凍存液，液氮儲存 |
倍增時間 |
|
STR鑒定位點 |
|
二、細(xì)胞培養(yǎng)操作
1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
c、按6-8 mL/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
三、培養(yǎng)注意事項
1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。
2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由 客戶自行承擔(dān)。
3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細(xì)胞由于溫度 變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。
4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細(xì)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，，用新鮮的完全培養(yǎng)基重懸 細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。
5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。
6. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞 的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。
7. 該細(xì)胞僅供科研使用。
8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培 養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 收到細(xì)胞后第一次傳代建議 1：2 傳代 。
9. 注意： 1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。
關(guān)鍵字： NR8383;大鼠肺泡巨噬細(xì)胞;
上海鈺博生物科技有限公司是2012年5月由“海歸”組成的創(chuàng)業(yè)團(tuán)隊與兩個專業(yè)投資機構(gòu)發(fā)起成立的，以
開發(fā)生產(chǎn)科研試劑和特色檢驗產(chǎn)品為方向，經(jīng)過兩年多的努力，已經(jīng)建立了免疫學(xué)和分子生物學(xué)的五個技術(shù)平臺，開發(fā)了ELISA/ELISpot酶聯(lián)免疫試劑盒、重組蛋白、熒光標(biāo)記抗體、四聚體(Tetramer)特異性T細(xì)胞檢測試劑盒、Aimplex流式高通量多因子檢測、microRNA表達(dá)譜分析和功能研究等系列產(chǎn)品和服務(wù)，與國內(nèi)外免疫學(xué)、干細(xì)胞、傳染病和腫瘤研究及臨床檢驗領(lǐng)域的科學(xué)家們建立了良好的合作關(guān)系，形成了一定的品牌影響力。鈺博生物另建有七大技術(shù)服務(wù)平臺（ELISA定制服務(wù)，免疫學(xué)檢測服務(wù)、分子生物學(xué)技術(shù)服務(wù)、蛋白表達(dá)與純化技術(shù)服務(wù)、抗體制備技術(shù)服務(wù)、細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)服務(wù)、整體實驗課題服務(wù)。用專業(yè)的知識、專業(yè)的設(shè)備、專業(yè)的態(tài)度為客戶提供一站式實驗技術(shù)服務(wù)！