乙酰膽堿酯酶染色液(亞鐵氰化銅法)
簡(jiǎn)介：
膽堿酯酶(cholinesterase，ChE)屬于特異性酯酶，可分為兩大類。一類是乙酰膽堿酯(Acetylcholinesterase，AChE)又稱為真性膽堿酯酶，能水解乙酰膽堿，起到生理 的調(diào)節(jié)作用；另一類為膽堿酯酶，又稱假性膽堿酯酶(Pseudocholinesterase，PsChE)， 能水解膽堿的酯而不能水解乙酰膽堿酯。乙酰膽堿酯酶主要存在于神經(jīng)元的胞質(zhì)內(nèi)、 神經(jīng)不肌肉接頭處即所謂運(yùn)動(dòng)終板處；PsChE 主要存在于血漿、胰腺、唾液腺內(nèi)，生理功能尚不明確。乙酰膽堿酯酶染色液(亞鐵氰化銅法)屬于Karnovsky 和Roots 法，其染色原理是乙酰膽堿酯酶水解碘化乙酰硫代膽堿，釋放乙酸和硫代膽堿。硫代膽堿中 的硫氫基(-SH)把鐵氰化鉀還原為亞鐵氰化鉀，后者與銅離子結(jié)合形成不溶性的紅棕色至深棕色的亞鐵氰化銅沉淀在酶活性部位而顯示出來(lái)。其優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便、酯酶的擴(kuò) 散較少，其缺點(diǎn)是對(duì)底物對(duì)組織的滲透性較差。該染色液可用于觀察中樞神經(jīng)和周圍 神經(jīng)纖維等疾病情況下的改變，亦有利于巨結(jié)腸癥、腸神經(jīng)元發(fā)育異常的診斷。有機(jī) 農(nóng)藥中毒時(shí)可使該酶受到抑制，酶的活性下降而呈陰性反應(yīng)。
組成：
產(chǎn)品名稱 | SE005-10ml×2 | SE005-20ml×2 | Storage |
試劑(A):AChE 孵育液 | A1: AChE Iodide | 5mg | 10mg | 4℃ 避光 |
A2: AChE Buffer A | 1ml | 2ml | RT |
A3: AChE Buffer B | 7ml | 14ml | 4℃ 避光 |
A4: AChE Buffer C | 1ml | 2ml | 4℃ 避光 |
A5: AChE Buffer D | 1ml | 2ml | 4℃ 避光 |
A6: Iso-OMPA | 0.2ml | 0.4ml | -20℃ 避光 |
試劑(B): 蘇木素染色液 | 10ml | 20ml | 4℃ 避光 |
試劑(C): AChE-Che抑制劑 | 0.2ml | 0.4ml | 4℃ 避光 |
說(shuō)明書 | 一份 |
自備材料：
1、10%甲醛鈣固定液
2、恒溫培養(yǎng)箱
3、光學(xué)顯微鏡
操作步驟(僅供參考)：
1、冰凍切片，厚 6μm，不固定或置于遇冷的 10%甲醛鈣固定 10min。
2、蒸餾水洗 3 次，每次 1min。
3、配制AChE 孵育液：臨用前，取A2 加入至A1 中，使后者完全溶解，即為A12 混合液，4℃保存。取適量的A12 混合液、A3、A4、A5、A6，按A12 混合
液:A3:A4:A5:A6=1:7:1:1:0.2 充分混合，即為AChE 孵育液，6h內(nèi)使用。
注意：如果想顯示AChE 和ChE，即無(wú)需區(qū)分AChE 和ChE，無(wú)需加入Iso-OMPA。
4、切片入預(yù)溫的AChE 孵育液中，37℃避光孵育 1～3h(一般不超過(guò) 6h)，至切片呈淡棕色時(shí)取出。
5、蒸餾水洗，鏡下觀察如活性部位仍較淡，可于蒸餾水洗后再進(jìn)行孵育，至反應(yīng)合適為止。
6、流水沖洗 5min。
7、滴加蘇木素染色液淺染細(xì)胞核 3～5min。
8、流水沖洗 10min。
9、常規(guī)脫蠟透明，中性樹膠封固。
染色結(jié)果：
AChE 酶活性部位 | 紅棕至深棕色 |
細(xì)胞核 | 藍(lán)色 |
陰性對(duì)照(可選)：
取配制好的AChE孵育液，按AChE孵育液:AChE-ChE抑制劑=50:1充分混合。取相同切片入含AChE抑制劑的AChE孵育液中，其余同上，呈陰性反應(yīng)。
注意事項(xiàng)：
1. 本染色液適用于冰凍切片，同時(shí)應(yīng)減少切片在室溫暴露的時(shí)間。
2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
關(guān)鍵字： 乙酰膽堿酯酶染色液;
伊勢(shì)久（江蘇連云港）生物科技有限責(zé)任公司，成立于2019年，坐落于新亞歐大陸橋東方橋頭堡連云港市。公司由資深行業(yè)專家和雙一流高校博士聯(lián)合創(chuàng)辦，主要從事生化檢測(cè)、病理檢測(cè)和原料酶等相關(guān)試劑的研發(fā)和生產(chǎn)。
我司位于聯(lián)東U谷科技創(chuàng)新谷內(nèi)的2000平米的生產(chǎn)、研發(fā)基地已建成投入運(yùn)行，其中包括150平米的超十萬(wàn)級(jí)的潔凈車間。我司堅(jiān)持以自主研發(fā)為核心，現(xiàn)已生產(chǎn)出的脲酶、tRNA轉(zhuǎn)運(yùn)核糖核酸、刀豆球蛋白、胰蛋白酶抑制劑等產(chǎn)品，熱銷市場(chǎng)以來(lái)收到了客戶的廣泛好評(píng)。
公司秉承“ 摯誠(chéng)科研、匠心傳承” 的發(fā)展理念，聚焦于前沿生物技術(shù)的應(yīng)用和創(chuàng)新，努力成為生物科技領(lǐng)域的標(biāo)桿企業(yè)。堅(jiān)持以客戶為中心，致力于為中國(guó)的科研工作者提供高品質(zhì)的產(chǎn)品和專業(yè)服務(wù)，始終是我們努力的目標(biāo)和方向。