一氧化氮（Nitric oxide，NO）含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)

                                                  分光光度法 50管/48樣

正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定                                             

測(cè)定意義：

NO（Nitric Oxide，NO）廣泛分布于生物體內(nèi)神經(jīng)、循環(huán)、呼吸、消化、泌尿生殖等系統(tǒng)中，特別是神經(jīng)組織中較豐富。它作為細(xì)胞間及細(xì)胞內(nèi)的信息物質(zhì)，發(fā)揮信號(hào)傳遞的作用，是一種新型的生物信使分子，在機(jī)體的生理、病理過(guò)程中起著重要的作用。

測(cè)定原理：

NO在體內(nèi)或水溶液中極易氧化生成NO2—，在酸性條件下，NO2—與重氮鹽磺酸胺生成重氮化合物，進(jìn)一步與萘基乙烯基二胺偶合，產(chǎn)物在550nm處有特征吸收峰，測(cè)定其吸光值，可以計(jì)算NO含量。

組成：

試劑二：液體15ml×1瓶，4℃避光保存。（用之前60℃加熱震蕩15min）

自備儀器和用品：

天平、研缽或勻漿器、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1ml玻璃比色皿、蒸餾水。

樣品處理：

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1ml提取液）進(jìn)行冰浴勻漿。10000g，4℃離心15min，取上清，置冰上待測(cè)。

2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后10000g，4℃，離心15min，取上清置于冰上待測(cè)。

3. 體液和培養(yǎng)液等其它液態(tài)樣品：直接測(cè)定。

測(cè)定步驟和操作表：

NO含量計(jì)算

標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：y= 0.016x -0.0103，R2= 0. 9986 

1、組織樣品：

（1）按樣本質(zhì)量計(jì)算

NO含量（μmol/g 鮮重）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V反總÷（V樣÷V樣總×W）×10-3

                  = 0.14×（ΔA +0.0103）÷W

（2）按樣本蛋白濃度計(jì)算

NO含量（μmol/mg prot）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V反總÷（V樣×Cpr）×10-3

                  = 0.14×（ΔA +0.0103）÷Cpr

2、細(xì)胞：

NO含量（μmol/104 cell）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V反總÷（V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量）×10-3

= 0.14×（ΔA +0.0103）÷細(xì)胞數(shù)量（萬(wàn)個(gè)）

3、其他樣品：

NO含量（μmol/L）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V反總÷V樣                   

= 140×（ΔA +0.0103）

V反總：反應(yīng)總體積，0.9ml；V樣：反應(yīng)中樣品體積，0.4ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；W：樣品質(zhì)量，g；Cpr：蛋白濃度，mg/ml

溫馨提示：本產(chǎn)品不可用于臨床用途，詳詢客服。