可溶性果膠(WSP)含量試劑盒說明書

微量法 100 管/48 樣 

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義： 

果膠是構(gòu)成細(xì)胞初生壁和中膠層的主要成分，主要由原果膠、果膠酸甲酯和果膠酸組成。果膠中含有 半乳糖醛酸、乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸等，是許多高等植物細(xì)胞壁中含量最豐富的多糖成分，其獨(dú)特 的物理、化學(xué)性質(zhì)影響著植物源食品的口感和品質(zhì)。果膠間以 Ca 2+橋及其他離子鍵、氫鍵、糖苷鍵、酯鍵 和苯環(huán)偶聯(lián)的方式交聯(lián)，通過不同的抽提方法可以提取各種形式的果膠，如水溶性果膠（WSP）、離子結(jié) 合型果膠（ISP）和共價(jià)結(jié)合果膠（CSP）。

測(cè)定原理： 

利用酸溶液提取得到（WSP）可溶性果膠，采用咔唑比色法測(cè)定果膠含量。果膠水解成半乳糖醛酸， 在硫酸溶液中與咔唑試劑進(jìn)行縮合反應(yīng)，生成物質(zhì)在 530 nm 處有最大吸收峰。

需自備儀器和用品： 

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英玻璃比色皿/96 孔板、80％乙醇、丙酮、 濃硫酸（不允許快遞）、研缽和蒸餾水。 

樣品的前處理： 

1、細(xì)胞壁的提?。喝〖s 0.3g 樣本，加入 1ml 80％乙醇，室溫快速勻漿，95℃水浴 20min，冷卻至室 溫，4000g 25℃離心 10min，棄上清。沉淀加入 1.5ml80％乙醇和丙酮各洗一遍（渦旋振蕩 2min 左右，4000g 25℃離心 10min，棄上清即可），沉淀即為粗細(xì)胞壁，加入 1ml 試劑一（去除淀粉）浸泡 15 小時(shí)，4000g 25℃離心 10min，棄上清，將沉淀干燥，稱重得細(xì)胞壁物質(zhì)（CWM）。

2、WSP 的提?。悍Q取烘干的 CWM 3mg，加入 1ml 試劑二，充分勻漿(若烘干物質(zhì)質(zhì)地堅(jiān)硬，可先研 碎后再加入 1ml 試劑二勻漿，或者用勻漿器勻漿)。8000g 4℃離心 10min，取上清液待測(cè)。