線粒體檸檬酸（Mitochondrion citric acid, MCA）含量試劑盒說明書 

微量法 100 管/96 樣 

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定 

測定意義： 

MCA 是線粒體三羧酸循環(huán)的第一個中間產物，由檸檬酸合酶催化乙酰 CoA 與草酰乙酸合成，其含量 是三羧酸循環(huán)強度的主要指標之一。 配合測定丙酮酸含量、丙酮酸脫氫酶活性、乙酰 CoA 含量、檸檬酸合酶活性和 MCA 含量，其中（1）丙 酮酸含量和丙酮酸脫氫酶活性變化可以反映糖酵解進行程度，（2）綜合分析丙酮酸含量、丙酮酸脫氫酶 活性和乙酰 CoA 含量變化可以反映脂肪酸β-氧化途徑提供的乙酰 CoA 情況，（3）乙酰 CoA 含量、檸檬 酸合酶活性和 MCA 含量變化可以反映三羧酸循環(huán)進行狀況。

測定原理： 

MCA 在檸檬酸裂解酶的作用下，生成α-酮酸（草酰乙酸）；在弱酸性條件下，α-酮酸進一步與苯肼反 應，生成相應的α-酮酸苯腙；α-酮酸苯腙在 330nm 處有吸收峰，該波長下吸光度的變化程度可反映出 MCA 的含量。

自備儀器和用品：

分光光度計/酶標儀、水浴鍋、可調式移液槍、微量石英比色皿/96 孔板（UV 板）、研缽、蒸餾水。 

線粒體中檸檬酸提取：

稱 0.05~0.1g 樣品（建議稱 0.1g 樣本），加入 0.5ml 酸性提取液，冰上充分研磨，600g/min 4℃離心 5min； 取上清至另一 EP 管中，11000g/min 4℃離心 10min，棄上清（取 300μl 該上清液和 300μl 堿性提取液中和 后可用于細胞質 CA 含量測定）；沉淀即線粒體，向沉淀中加入 0.5ml 酸性提取液，充分懸浮溶解，超聲 波破碎（功率 20％，超聲 3 秒，間隔 10 秒，重復 30 次），取此溶液 300μl 和 300μl 堿性提取液中和，混 勻，置冰上待測（不可用于蛋白質含量測定）。