試劑盒組成:
名稱 | 96孔配置 | 48孔配置 | 備注 |
微孔酶標(biāo)板 | 12孔×8條 | 12孔×4條 | 無 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 0.3mL*6管 | 0.3mL*6管 | 無 |
樣本稀釋液 | 6mL | 3mL | 無 |
檢測抗體-HRP | 10mL | 5mL | 無 |
20×洗滌緩沖液 | 25mL | 15mL | 按說明書進(jìn)行稀釋 |
底物A | 6mL | 3mL | 無 |
底物B | 6mL | 3mL | 無 |
終止液 | 6mL | 3mL | 無 |
封板膜 | 2張 | 2張 | 無 |
說明書 | 1份 | 1份 | 無 |
自封袋 | 1個(gè) | 1個(gè) | 無 |
備注:
1. (96T/48T)打開包裝后請及時(shí)檢查所有物品是否齊全。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為:320、160、80、40、20、0 pg/mL。
3. 經(jīng)過大量正常標(biāo)本檢驗(yàn),標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi),實(shí)驗(yàn)過程中直接取50μL樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過最大標(biāo)準(zhǔn)品濃度時(shí),可用樣本稀釋液將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
檢測前準(zhǔn)備工作:
1. 請?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒,平衡至室溫。
2. 從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶,屬于正常現(xiàn)象;放置室溫,輕搖均勻,待結(jié)晶完全溶解后再配置洗滌液??蓪?0ml濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水稀釋配置成400ml工作濃度的洗滌液,未用完的放回4℃
3. 20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。。
注意事項(xiàng):
1. 嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
2. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
3. 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。
4. 底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。
5. 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。
6. 在儲存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
8. 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。
9. 不能使用過期產(chǎn)品。
10. 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應(yīng)管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。
示例數(shù)據(jù):
標(biāo)準(zhǔn)品濃度(pg/mL) | 5000 | 2500 | 1250 | 625 | 312.5 | 156.25 | 78.13 | 0 |
OD值 | 2.422 | 1.643 | 0.928 | 0.781 | 0.529 | 0.264 | 0.185 | 0.063 |
校正OD值 | 2.359 | 1.58 | 0.865 | 0.718 | 0.466 | 0.204 | 0.122 | 0 |
以下數(shù)據(jù)和曲線僅供參考,實(shí)驗(yàn)者需根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

本圖所示標(biāo)準(zhǔn)曲線僅供示例,結(jié)果計(jì)算應(yīng)以同次試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)品所繪標(biāo)準(zhǔn)曲線為準(zhǔn)計(jì)算樣本結(jié)果。
技術(shù)小提示:
1. 當(dāng)混合或重溶蛋白溶液時(shí),盡量避免起沫。
2. 為了避免交叉感染,配置不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品、上樣、加不同試劑都需要更換槍頭。另外不同試劑請分別使用不同的移液槽。
3. 每次孵育時(shí),請正確使用封板膠可保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。
4. 混合后的顯色底物在上板前應(yīng)為無色,請避光保存;加入微孔板后,將由無色變成不同深度的藍(lán)色。
5. 終止液上板順序應(yīng)同顯色底物上板順序一致;加入終止液后,孔內(nèi)顏色由藍(lán)變黃;若孔內(nèi)有綠色,則表明孔內(nèi)液體未混勻;請充分混合。
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