支原體染色液（Dienes染色液）

簡(jiǎn)介：

支原體染色液（Dienes染色液）是一種經(jīng)典的利用天青美藍(lán)染色檢測(cè)支原體污染的試劑，經(jīng)常用于支原體的培養(yǎng)鑒定試驗(yàn)，支原體菌落被染成藍(lán)色，L型細(xì)菌菌落在短時(shí)間內(nèi)能染上藍(lán)色，但經(jīng)15～30 min后，由于細(xì)菌的新陳代謝作用把美藍(lán)還原成無(wú)色，而支原體則長(zhǎng)時(shí)間保持其染色。該試劑檢測(cè)細(xì)胞含量范圍一般為0.1～1×106之間。

組成：

保存條件：

4℃避光保存，一年有效。

操作步驟(僅供參考)：

(一)貼壁細(xì)胞

1、 取潔凈蓋玻片在70%乙醇中浸泡5分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間，無(wú)菌超凈臺(tái)內(nèi)吹干或用無(wú)菌于PBS或生理鹽水洗滌3次，再用細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌1次。將蓋玻片置于6孔板或其他培養(yǎng)皿內(nèi)，接種細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)夜，使融合率約為50%～80%。

1. 加入Dienes染色液覆蓋表面，孵育。

2. 棄染色液，PBS或生理鹽水洗2次，每次3 min，吸盡液體。

3. 顯微鏡下觀察。

(二)懸浮細(xì)胞

1、 低速離心離心后吸去大部分液體保留約液體，再緩緩懸起細(xì)胞，滴加至載玻片上，盡量使細(xì)胞分布均勻。

2、 稍晾干，使細(xì)胞貼在載玻片上不易隨液體流動(dòng)。

3、 加入Dienes染色液覆蓋表面，孵育。

4、 棄染色液，PBS或生理鹽水洗2次，每次3 min，吸盡液體。

5、 顯微鏡下觀察。

注意事項(xiàng)：

1、 在為了獲得細(xì)胞沉淀的離心的過(guò)程中，對(duì)于特殊細(xì)胞，如果細(xì)胞沉淀不充分，可以適當(dāng)提高離心力或延長(zhǎng)離心時(shí)間。

2、 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。