支原體染色液（Dienes染色液）

簡介：

支原體染色液（Dienes染色液）是一種經(jīng)典的利用天青美藍染色檢測支原體污染的試劑，經(jīng)常用于支原體的培養(yǎng)鑒定試驗，支原體菌落被染成藍色，L型細菌菌落在短時間內(nèi)能染上藍色，但經(jīng)15～30 min后，由于細菌的新陳代謝作用把美藍還原成無色，而支原體則長時間保持其染色。該試劑檢測細胞含量范圍一般為0.1～1×106之間。

組成：

保存條件：

4℃避光保存，一年有效。

操作步驟(僅供參考)：

(一)貼壁細胞

1、 取潔凈蓋玻片在70%乙醇中浸泡5分鐘或更長時間，無菌超凈臺內(nèi)吹干或用無菌于PBS或生理鹽水洗滌3次，再用細胞培養(yǎng)液洗滌1次。將蓋玻片置于6孔板或其他培養(yǎng)皿內(nèi)，接種細胞培養(yǎng)過夜，使融合率約為50%～80%。

1. 加入Dienes染色液覆蓋表面，孵育。

2. 棄染色液，PBS或生理鹽水洗2次，每次3 min，吸盡液體。

3. 顯微鏡下觀察。

(二)懸浮細胞

1、 低速離心離心后吸去大部分液體保留約液體，再緩緩懸起細胞，滴加至載玻片上，盡量使細胞分布均勻。

2、 稍晾干，使細胞貼在載玻片上不易隨液體流動。

3、 加入Dienes染色液覆蓋表面，孵育。

4、 棄染色液，PBS或生理鹽水洗2次，每次3 min，吸盡液體。

5、 顯微鏡下觀察。

注意事項：

1、 在為了獲得細胞沉淀的離心的過程中，對于特殊細胞，如果細胞沉淀不充分，可以適當提高離心力或延長離心時間。

2、 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。