RIPA裂解液（強）
簡介：
多種成分均可以從細(xì)胞中提取總蛋白，如Triton、SDS、NP-40等。RIPA裂解液(強) (Enhanced RIPA Lysis Buffer)是采用一種經(jīng)典的裂解方法獲得總蛋白的裂解液。所獲得的蛋白質(zhì)可用于PAGE電泳、Western、免疫沉淀(Immunol Precipitation，IP)和免疫共沉淀(co-IP)等。 Weak RIPA Lysis Buffer主要由Tris 、NP-40、sodium deoxycholate等組成，并含有多種蛋白酶抑制劑成分，可以有效抑制蛋白的降解，并維持原有的蛋白間相互作用。
伊勢久RIPA裂解液（強）的主要由Tris、NP40、deoxycholate等組成，有多種蛋白酶抑制劑成分，可以有效抑制蛋白的降解，并維持原有的蛋白間相互作用。
組成：
產(chǎn)品名稱 | PC012-100ml | PC012-500ml |
RIPA 裂解液（強） | 100ml | 500ml |
PMSF100mM | 1.5ml | 5ml |
使用說明書 | 一份 |
存儲條件：
RIPA裂解液保存于-20℃。12個月有效期。
操作步驟(僅供參考)：
無需配制，直接使用。
(一)貼壁培養(yǎng)細(xì)胞
2、 去除貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液，低速離心，棄上清。
3、 按照6孔板每孔加入150～250 ul含有PMSF的裂解液的比例，加入RIPA Lysis Buffer 。移液器輕輕吹打，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。置于冰上或4℃裂解。通常裂解液作用于細(xì)胞內(nèi)，細(xì)胞就會被裂解/如果是所提蛋白樣品用于CHIP, 應(yīng)置于冰上或4℃裂解。 通常裂解液作用于細(xì)胞1～3秒內(nèi)，細(xì)胞就會被裂解。
4、 離心(如無低溫離心機，室溫下離心亦可)，取上清。
5、 進行后續(xù)的Western、染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)等操作。。
2、 去除貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液，低速離心，棄上清，留取沉淀。
3、 按照6孔板每孔加入150～250μl含有PMSF的裂解液的比例加入Enhanced RIPA Lysis Buffer。移液器輕輕吹打，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液作用于細(xì)胞內(nèi)，細(xì)胞就會被裂解/如果是所提蛋白樣品用于CHIP, 應(yīng)置于冰上或4℃裂解。
4、 離心(如無低溫離心機，室溫下離心亦可)，取上清。
5、 進行后續(xù)的Western、染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)等操作。
(二)懸浮培養(yǎng)細(xì)胞
1、 取Enhanced RIPA Lysis Buffer置于室溫溶解混勻后，使用前取適量裂解液加入PMSF，使其最終濃度為1mM。
2、 低速離心懸浮細(xì)胞，棄上清，收集沉淀。
3、 用手指輕彈細(xì)胞，使其松散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150～250μl含有PMSF的裂解液的比例，加入Weak RIPA Lysis Buffer。
4、 4℃離心(如無低溫離心機，室溫下離心亦可)，取上清。
5、 進行后續(xù)的Western、染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)等操作。
(三)組織樣本
1、 取Enhanced RIPA Lysis Buffer 置于室溫溶解混勻，使用前取適量裂解液加入PMSF，使其最終濃度為1mM。
2、 把組織剪切成細(xì)小的碎片，越小越好。
3、 取在液氮或超低溫冰箱中冷凍以上的組織，迅速用液氮研磨，研磨過程盡量控制在1～2min之內(nèi)，以減少蛋白的降解。
3、 按20mg組織加入150～250μl裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解。
4、 離心(如無低溫離心機，室溫下離心亦可)，取上清。
5、 進行后續(xù)的Western、染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)等操作。
注意事項：
1、 去除貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液后，如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不用清洗。
2、 如果裂解不充分可以適當(dāng)增加裂解液的用量，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減 少裂解液的用量。
3、 在培養(yǎng)細(xì)胞的裂解中，如果細(xì)胞量較多，必需分裝成50-100萬細(xì)胞/離心管，然后再裂解。少量的細(xì)胞由于裂解液容易和細(xì)胞充分接粗，相對比較容易裂解充分。
4、 如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈Vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實驗。
5、 溶解Enhanced RIPA Lysis Buffer r時，應(yīng)盡量縮短溶解時間，避免裂解液中的有效成分失效。
6、 細(xì)胞裂解的操作步驟，應(yīng)置于冰上或4℃進行。
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我司位于聯(lián)東U谷科技創(chuàng)新谷內(nèi)的2000平米的生產(chǎn)、研發(fā)基地已建成投入運行，其中包括150平米的超十萬級的潔凈車間。我司堅持以自主研發(fā)為核心，現(xiàn)已生產(chǎn)出的脲酶、tRNA轉(zhuǎn)運核糖核酸、刀豆球蛋白、胰蛋白酶抑制劑等產(chǎn)品，熱銷市場以來收到了客戶的廣泛好評。
公司秉承“ 摯誠科研、匠心傳承” 的發(fā)展理念，聚焦于前沿生物技術(shù)的應(yīng)用和創(chuàng)新，努力成為生物科技領(lǐng)域的標(biāo)桿企業(yè)。堅持以客戶為中心，致力于為中國的科研工作者提供高品質(zhì)的產(chǎn)品和專業(yè)服務(wù)，始終是我們努力的目標(biāo)和方向。