品名：Super-GST? GST 蛋白純化 Kit，貨號：P0007，品牌：Engibody
訂購及技術咨詢：朱小鷗，13817407320(微信同號)
保姆級GST 蛋白純化試劑盒
Super-GST? GST 標簽蛋白純化試劑盒的優(yōu)勢
1、本試劑盒中包含特殊配方的雷霆細菌裂解液，可快速裂解大腸桿菌并完全釋放可溶型GST標簽蛋白及包涵體（無需超聲破菌，無需加熱，快速溫和，完全裂解。盒內裂解液5-10分鐘內即可高效裂菌并完全釋放GST標簽融合蛋白）。
2、本試劑盒可以通過溫和的、非變性的洗脫條件得到目的蛋白。最大程度保留蛋白活性。
3、試劑盒中的GSH填料可以重復使用10次以上。
4、本試劑盒是一個Complete All-In-One Kit — 包含全部試劑，高效細菌裂解液、平衡緩沖液、洗滌緩沖液、洗脫緩沖液、洗脫劑、GSH填料、重力空柱（帶控流閥）以及下游WB檢測所需的高特異性GST小鼠單抗。
讓GST蛋白純化變得簡單高效！
第一部分：背景簡介及應用場景
谷胱甘肽-S-轉移酶(GST)是一個由211個氨基酸組成的大小為26kDa序列，它是一種廣泛使用的可提高靶蛋白的溶解度親和標簽。GST標簽與固定化的谷胱甘肽GSH具有親和力，常用于原核表達。它可以與一個蛋白的N端或C端融合。
谷胱甘肽親和是一種有效的一步純化GST(谷胱甘肽S-轉移酶)標簽蛋白的方法。GST可作為一種可溶性蛋白在大腸桿菌細胞質中大量表達，并具有完全的酶活性。此外，許多在大腸桿菌中表達時不溶的真核蛋白，在表達為GST標簽蛋白時被證明至少部分可溶。
重組標簽蛋白純化利用谷胱甘肽GSH的結構能夠和GST（谷胱甘肽S-轉移酶）結合位點互補,谷胱甘肽偶聯在瓊脂糖介質上,帶有GST的標簽蛋白與瓊脂糖介質上交聯的谷胱甘肽配體互補性結合,這種可逆性的結合在溫和、非變性的條件下通過參加還原型谷胱甘肽競爭性洗脫下來,雜質通過洗滌緩沖液被去除,從而純化富集目的蛋白。
GST 標簽純化蛋白的優(yōu)點
1）、GST標簽蛋白能提高蛋白的溶解度，可把一些難溶蛋白變成可溶性蛋白，使實驗變得具有可行性。
2）、GSH谷胱甘肽偶聯磁珠親和力強，洗脫純度高，且是非變性、溫和、競爭性洗脫，有利于保持蛋白活性。
3）、可用蛋白酶進行去除。
4）、適用范圍廣，可在不同宿主中高效表達。
5）、一般來說，使用一步純化出的GST標簽蛋白純度高于一步純化出的His標簽蛋白純度。
GST 標簽純化蛋白的缺點
1）、融合表達的GST標簽，肽鏈較長，大到26kD，可能會改變目的蛋白的天然構象。
2）、僅能純化可溶性蛋白，若蛋白不可溶，則很難用變性的方法純化。因為一旦將目的蛋白變性，則GST標簽也會被變性，那么就會失去生物活性，也就無法結合GSH填料了。
第二部分：技術原理
無論是大腸桿菌或者其他宿主細胞中，天然表達的還是重組表達的，各種來源的GST標簽蛋白，都可以用固定的谷胱甘肽親和層析法純化，然后用過量的還原性谷胱甘肽GSH競爭洗脫。使用以瓊脂糖凝膠為基質的Glutathione Agarose Resin 6FF介質，可以在相對較高流速的情況下，實現對目的蛋白的純化。此介質通過標簽與配體結合，緩沖液洗脫去除雜質，然后標簽蛋白在溫和且非變性的條件下被洗脫，使得蛋白的抗原性能和功能活性得到保護。
GST標簽的去除
如果GST標簽需要切除，包含 PreScission 蛋白酶識別位點、Thrombin識別位點或Factor Xa識別位點的標簽蛋白可以在與GSH填料柱結合時或在洗脫后進行標簽去除。一般來說，柱上切割是推薦的方法，因為許多潛在的雜質都能被洗掉，目的蛋白洗脫時具有更高的純度。如果切割條件需要優(yōu)化，建議在洗脫后進行標簽去除。
第三部分：技術流程
第四部分：實驗結果與示例展示
圖注如下：
GST-tagged protein purification from whole cell extracts. Whole cell extracts containing GST-DHFR (left) and GST alone (right) were loaded, washed, and eluted from glutathione resin columns. Then, the resulting purification fractions were analyzed by SDS-PAGE (A & B) and Western blot with an anti-GST IgG (C & D).
第五部分：GST 蛋白純化試劑盒組分清單
（共計10個組分，均可單獨購買）
| 編號 | 組分名稱 | 數量 | 保存 | 注意事項 |
| 下列組分收到后需儲存在 4 °C中。 |
| P3401 | Glutathione Agarose Resin 6FF (GSH填料) | 5 mL | +4 °C | 50% slurry，含有2.5mL settled resin，填料可以重復使用10次以上 |
| GST-01 | Binding / Equilibration Buffer for GST Protein (BE緩沖液for GST Protein) | 100 mL | +4 °C |
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| GST-02 | Wash Buffer for GST Protein | 250 mL | +4 °C |
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| GST-03 | Elution Buffer for GST Protein | 100 mL | +4 °C | 溫和非變性洗脫液 |
| GST-04 | TCEP | 250 mg | +4 °C |
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| 下列組分收到后需儲存在室溫中 |
| PURI-04 | 重力柱空柱(12mL)及控流閥 | 1個 | 室溫 |
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| PULL-04 | 還原型谷胱甘肽 | 307 mg | 室溫 | 按需稱取溶解，易于氧化失效 |
| IF9217 | QuickStain? One-Step Protein Gel (PAGE) Blue Stain
蛋白PAGE膠快速染色液（用于顯示蛋白條帶） | 50mL | 室溫 | 超快染色蛋白膠，靈敏度極高，10分鐘即可讓低至10ng的蛋白顯示條帶 |
| 下列組分收到后必須要儲存在 -20 °C中 |
| Lysis-01 | 雷霆大腸桿菌裂解液
Bacterial Lysis Buffer for Purification | 50 mL | -20°C | 超級強大，直接裂解大腸桿菌釋放蛋白，含有溶菌酶及核酸酶，必須-20度保存 |
| AT0027 | Anti-GST小鼠單克隆抗體 | 25 μL | -20 °C | 用于下游WB檢測 |
| AT0098 | 山羊抗小鼠二抗HRP標記 | 100 μL | -20 °C | 用于下游WB檢測
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關鍵字： GST融合蛋白;蛋白表達純化;GST蛋白純化試劑盒;GSH;GSH填料;
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