中文名：溴化氰活化的瓊脂糖
英文名：CNBr-Activated Agarose
中文別名：Cyanogen bromide-activated Agarose
英文別名：Cyanogen bromide-activated Agarose
貨號：C393372
包裝：15g、1g、5g
Cas號：68987-32-6
存儲溫度：-20°C儲存
產(chǎn)品介紹：
氰化溴化物活化的瓊脂糖是一種用乳糖穩(wěn)定的凍干粉，可用于親和層析、蛋白層析、蛋白相互作用、抗體標(biāo)記、抗體修飾以及將抗體附著于瓊脂糖珠上。
偶聯(lián)方法
(1) 液配制
偶聯(lián)液:0.2M NaHCO0.5M NaCl,pH8.0:
封閉液:0.1M Tris;pH8.5;
清洗液D:0.1MZ酸乙酸鈉,0.5M NaCl,pH3.0;
清洗液2:0.1M Tris-HCL,0.5M NaClpH8.0。
必須盡量縮短清洗和偶聯(lián)之間的時間間隔，因此建議在偶聯(lián)前準(zhǔn)備所有需要的溶液。緩沖液均需先過濾再使用。
(2)蛋白預(yù)處理
每毫升的介質(zhì)可偶聯(lián)10~12mg的蛋白。干粉狀蛋白可用偶聯(lián)液溶解蛋白,液體狀蛋白需將其緩沖液置換為偶聯(lián)液。
(3)清洗
取適量丙酮保存的凝膠放在玻璃過波漏斗過波掉丙酮回收，用純水清洗4倍膠體積，再用4倍膠體積的偶聯(lián)液洗滌。
(4)偶聯(lián)
偶聯(lián)比(凝膠:偶聯(lián)樣品液)=1:2(:V)洗滌完成后，快速將清洗后抽干的凝膠加到蛋白溶液中，攬勻，pH調(diào)到8.3,于室溫振蕩反應(yīng)2h,轉(zhuǎn)速70rpm。
(5)封閉
反應(yīng)完成后收集偶聯(lián)樣品,可測偶聯(lián)樣品液中蛋白濃度(紫外吸收法),計算偶聯(lián)率。收集的偶聯(lián)樣品用超純水清洗兩遍,封閉液清洗一遍，再加入2倍膠體積的封閉液，室溫振蕩到閉1h,以消除轉(zhuǎn)余活性基團。
(6) 清洗
取封閉后的凝膠，用超純水清洗3遍,清洗液D、清洗液(2重紅清洗3遍，超純水清洗3遍，蛋白偶聯(lián)完成，該親和介質(zhì)可使用。
(7)保存
20%的乙醇,4°C保存。
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關(guān)鍵字： Cyanogen bromide-activated Agarose;Cyanogen bromide-activated Agarose
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