RNase R（Ribonuclease R）是一種來源于大腸桿菌RNR超家族的3’-5’核糖核酸外切酶，可從3’-5’方向將RNA逐步切割成二核苷酸和三核苷酸。RNase R可消化幾乎所有的線性RNA分子，但不易消化環(huán)形RNA、套索結構或3’突出末端少于7個核苷酸的雙鏈RNA分子。
RNase R是circRNA的富集和鑒定實驗必備工具酶，可消化線性RNA以使環(huán)形RNA(circRNAs)或套索結構RNA(lariat RNA)得到富集。
RNase R消化RNA示意圖
應用場景
circRNA的富集：高通量測序是大批量發(fā)現circRNA最快捷的方法，需要對circRNA進行富集，此時RNase R消化就是必須的。
circRNA的鑒定：根據RNase R(+)和RNase R(-)組中是否檢測到條帶來證明檢測的分子是circRNA。
產品特征
特異性：特異性消化線性RNA
高效、快速：5-15min即可消化大部分線性RNA
buffer兼容性：消化產物可直接用于下游逆轉錄
使用方便：2種試劑，1步反應
產品信息
名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 目錄價（元） | 保存溫度 |
Ribonuclease R（RNase R) | R0301 | 500 U | 2280 | -20℃ |
R0302 | 5000 U | 詢價 | -20℃ |
標準反應體系下，于 37℃，10 min 將 1 μg poly(A)轉化成酸溶核苷酸所需的酶量定義為一個活力單位(U)。
產品組分
Storage Buffer |
50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0.1% Triton? X-100, 50% Glycerol |
10X Reaction Buffer |
200 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 M KCl, 1 mM MgCl2 |
反應體系
20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 100 mM KCl, 0.1 mM MgCl2, 37℃孵育。
注：1）RNase R 在 0.1-0.5 mM Mg2+存在時活性最高，反應中 EDTA 可能降低 RNase R 活性，此時可額外添加 MgCl2 使 Mg2+ 濃度最高達到 0.5 mM。2）孵育后可于 70℃，10 min 使酶失活，再進行下游實驗（如逆轉錄）；也可不滅活，直接純化后進行下游實驗。
質量控制
SDS-PAGE 檢測純度>99%；Total RNA 經 RNase R 消化后進行 RT-qPCR 檢測，線性 RNA 豐度明顯降低， 環(huán)形RNA 豐度基本不變。
性能比較：RNA電泳檢測
將10U RNase R加入到2.5 μg total RNA中，于37℃孵育30 min，之后直接進行電泳檢測，結果顯示RNase R+組28/18/5S條帶變淡（不可見），表明RNase R對total RNA的消化作用。吉賽和公司e或公司a的RNase R對total RNA消化效果相當。
性能比較：qRT-PCR檢測
將10U RNase R加入到2.5 μg total RNA中，于37℃孵育30 min，之后進行RT-qPCR實驗，結果顯示RNase R+ 組中hsa_circFOXO3_002和hsa_circMTO1_001的豐度基本不變，表明環(huán)形RNA耐受RNase R的消化。吉賽和公司e或公司a的RNase R效果相當。
注：數據計算以“RNase R+吉賽”組為對照，設定其相對豐度值為1
關鍵字： 核糖核酸外切酶;
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