9015-85-4
中文名稱
T4 DNA連接酶
英文名稱
T4 DNA LIGASE
CAS
9015-85-4
更新日期
2024/12/12 11:08:41
基本信息
中文別名
T4連接酶RNA LIGASE, T4 PAHGE, RECOMBINANT, SOLN.
英文別名
abs60084DNA LIGASE
EC 6.5.1.2
EC 6.5.1.1
IUB: 6.5.1.1
T4 DNA LIGASE
DNA LIGASE T4
RNA LIGASE, T4 PAHGE
Polynucleotide Ligase
DNA LIGASE, THERMOSTABLE
所屬類別
生物：核酸相關(guān)物理化學(xué)性質(zhì)
儲存條件−20°C
形態(tài)buffered aqueous glycerol solution
生物來源Escherichia coli (NM 989)
Specific Activity4,000U/mL
常見問題列表
應(yīng)用
T4 DNA連接酶即T4 DNA連接酶，可以催化粘端或平端雙鏈DNA或RNA的5’-P末端和3’-OH末端之間以磷酸二酯鍵結(jié)合，該催化反應(yīng)需ATP作為輔助因子T4 DNA Ligase即T4 DNA連接酶，可以催化粘端或平端雙鏈DNA或RNA的5’-P末端和3’-OH末端之間以磷酸二酯鍵結(jié)合，該催化反應(yīng)需ATP作為輔助因子。
概述
T4 DNA連接酶用于體外DNA連接、連接檢測PCR，體內(nèi)岡崎片斷連接成完整基因組DNA有重要作用。基因工程所用DNA連接酶由公司提供，最常用的是T4 DNA連接酶（T4Lig）。
連接機理與結(jié)構(gòu)
目前DNA連接反應(yīng)機理是基于切口雙鏈DNA底物得到的：普遍認為連接反應(yīng)由三步完成：①T4連接酶先由ATP供能產(chǎn)生E-AMP復(fù)合物；②E-AMP復(fù)合物識別雙鏈DNA切口位置，將AMP轉(zhuǎn)移到5’-P基團，形成5’-P-AMP復(fù)合物；③3’-OH親核攻擊5’-P-AMP形成磷酸二酯鍵，并釋放出AMP。連接酶分子大小
T4連接酶由T4嗜菌體30基因合成，最早從T4嗜菌體感染的E。coli提取。后來發(fā)現(xiàn)DNA復(fù)制缺失型嗜菌體中連接酶產(chǎn)量更高，從而作為連接酶的主要來源，目前市場供應(yīng)連接酶通過基因工程方法生產(chǎn)。
Murry測定T4連接酶分子量為63000~68000Da，Armstrong進一步確定為55，230Da，由487個氨基酸（Aa）殘基組成，基因長度1464bp（GenBank序列號為X00039）。按照分子量與分子大小比例關(guān)系估算，T4連接酶大小約3。4nm，可跨越約1個DNA雙螺旋長度（即10bp）。連接酶占據(jù)連接端口下游（5’-P端部）7~10bp，占據(jù)端口上游（3’-OH端部）3~5bp。