82911-69-1

190656-01-0

以9-芴甲基-N-琥珀酰亞胺基碳酸酯為原料合成(9H-芴-9-基)甲基羥氨基甲酸酯的一般步驟如下：首先，將羥胺鹽酸鹽（834 mg，12 mmol）溶解于40 mL碳酸氫鈉水溶液（2.2 g，26 mmol）中，并將溶液冷卻至5℃。隨后，將溶解在40 mL乙酸乙酯中的N-(9-芴基甲氧基羰氧基)琥珀酰亞胺（Fmoc-OSu，4.0 g，12 mmol）在冰浴條件下緩慢滴加到快速攪拌的羥胺溶液中。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌4小時(shí)，反應(yīng)進(jìn)程通過(guò)薄層色譜（TLC）監(jiān)測(cè)（展開(kāi)劑：乙酸乙酯/己烷=1:1，Rf=0.4）。反應(yīng)完成后，分離水層，有機(jī)層依次用飽和硫酸氫鉀水溶液和鹽水洗滌。有機(jī)萃取液在高真空下濃縮，隨后在己烷中研磨，得到N-Fmoc保護(hù)的羥胺（Fmoc-NHOH）為白色結(jié)晶固體，收率為80%。產(chǎn)物結(jié)構(gòu)通過(guò)1H NMR（JNM-LA300光譜儀，JEOL Ltd，Tokyo，Japan）確認(rèn)：δH（CDCl3）4.21（1H，t，F(xiàn)moc CH），4.32（2H，d，F(xiàn)moc CH2），7.28-7.43，7.68，7.86（8H，m，F(xiàn)moc Ar.CH），8.77（1H，s，NH），9.75（1H，br s，OH）。接下來(lái)，將Fmoc-NHOH（2當(dāng)量）與2-氯三苯甲基氯（CTC）樹(shù)脂（1.43 mmol/g）在二氯甲烷（DCM）中，加入N,N'-二異丙基乙胺（DIPEA；4當(dāng)量）作為堿，偶聯(lián)反應(yīng)進(jìn)行48小時(shí)。用10% DIPEA/甲醇（v/v）處理載有Fmoc-NHOH的CTC樹(shù)脂以封閉剩余的氯化物基團(tuán)。過(guò)濾后，通過(guò)Fmoc滴定測(cè)定樹(shù)脂的負(fù)載量為1.0 mmol/g。隨后，用20%哌啶/N-甲基-2-吡咯烷酮（NMP）處理30分鐘以去除Fmoc保護(hù)基，然后將Fmoc-1-Pro-OH或Fmoc-1-Phe-OH（2當(dāng)量）與樹(shù)脂在2-(1H-7-氮雜苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸鹽（HATU）、1-羥基-7-氮雜苯并三唑（HOAt）和DIPEA（4當(dāng)量）存在下，室溫偶聯(lián)1.5小時(shí)。再次用20%哌啶/NMP去除Fmoc保護(hù)基后，將HCA（2當(dāng)量）與氨基酸錨定樹(shù)脂在苯并三唑-1-基-氧-三-(二甲基氨基)-六氟磷酸鹽（BOP；2當(dāng)量）、羥基苯并三唑（HOBt；2當(dāng)量）和DIPEA（3當(dāng)量）存在下，偶聯(lián)5小時(shí)。最終產(chǎn)物通過(guò)30%三氟乙酸（TFA）/DCM（v/v）從樹(shù)脂上裂解1小時(shí)。過(guò)濾樹(shù)脂，濾液在高真空下濃縮，然后用冷乙醚沉淀。所得HCA-Phe-NHOH和HCA-Pro-NHOH通過(guò)QUATTRO Triple Quardrupole Tandem質(zhì)譜儀（Micromass & Waters，Milford，MA，USA）在National Instrumentation Center for Environmental Management（NICEM）進(jìn)行結(jié)構(gòu)確認(rèn)：CA-Phe-NHOH（m/z計(jì)算值：343.1 [M+H]+；實(shí)測(cè)值：343.0），CA-Pro-NHOH（m/z計(jì)算值：293.1 [M+H]+；實(shí)測(cè)值：293.1），DHCA-Phe-NHOH（m/z計(jì)算值：345.1 [M+H]+；實(shí)測(cè)值：345.1），DHCA-Pro-NHOH（m/z計(jì)算值：295.1 [M+H]+；實(shí)測(cè)值：295.1），pCoA-Phe-NHOH（m/z計(jì)算值：327.1 [M+H]+；實(shí)測(cè)值：327.1），pCoA-Pro-NHOH（m/z計(jì)算值：277.1 [M+H]+；實(shí)測(cè)值：277.0），F(xiàn)A-Phe-NHOH（m/z計(jì)算值：357.1 [M+H]+；實(shí)測(cè)值：357.1），F(xiàn)A-Pro-NHOH（m/z計(jì)算值：307.1 [M+H]+；實(shí)測(cè)值：307.0），SA-Phe-NHOH（m/z計(jì)算值：387.1 [M+H]+；實(shí)測(cè)值：387.0），SA-Pro-NHOH（m/z計(jì)算值：337.1 [M+H]+；實(shí)測(cè)值：337.1）。使用C18反相柱（120?，5μm，4.6×250 mm；AAPPTec，Louisville，KY，USA），通過(guò)RP-HPLC（Thermo Scientific Spectra System AS300；Thermo-Fisher，Waltham，MA，USA）分析產(chǎn)物純度。洗脫條件如下：流動(dòng)相A：0.1% TFA/水，流動(dòng)相B：0.1% TFA/乙腈，梯度洗脫：30分鐘內(nèi)從10% B升至90% B，流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：UV，280或326 nm。HCA-Phe-NHOH通過(guò)半制備RP-HPLC柱純化，使用A至B梯度（A：0.1% TFA水溶液，B：0.1% TFA的乙腈溶液；10%至90% B，30分鐘，流速為4.0 mL/min），隨后進(jìn)行冷凍干燥。

參考文獻(xiàn)：

[1] Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, 2013, vol. 23, # 4, p. 1136 - 1142